結(jié)核新疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)豚鼠模型的建立與重組結(jié)核疫苗(AEC-BC02)保護(hù)力評(píng)價(jià).pdf

1、結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)引起的一種古老而漫長(zhǎng)的感染性疾病。世界衛(wèi)生組織(WHO)2014年全球結(jié)核報(bào)告2013年新發(fā)病例大約900萬(wàn)，150萬(wàn)人死于結(jié)核病。世界衛(wèi)生組織在卡介苗建議書(shū)中對(duì)卡介苗的定義是“目前唯一使用的預(yù)防結(jié)核病疫苗，可用于預(yù)防嬰幼兒結(jié)核性腦膜炎和播散型結(jié)核病，但是不能預(yù)防原發(fā)感染或阻止肺部潛伏的結(jié)核桿菌的復(fù)活，而后者是人群中分

2、枝桿菌傳播的主要來(lái)源”。因此，研究結(jié)核新疫苗更是顯得迫在眉睫，目前國(guó)內(nèi)外研制的結(jié)核新疫苗根據(jù)使用人群不同用途不同主要分為初免疫苗、初免加強(qiáng)型疫苗及潛伏感染預(yù)防用疫苗。
　　本研究主要針對(duì)上述三種疫苗（初免疫苗、初免加強(qiáng)型疫苗、潛伏感染預(yù)防用疫苗）建立相應(yīng)疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)動(dòng)物模型。第一部分建立了結(jié)核分枝桿菌初免疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)豚鼠模型并對(duì)重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)保護(hù)力進(jìn)行評(píng)價(jià);第二部分建立了結(jié)核分枝桿菌初免加強(qiáng)型疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)豚

3、鼠模型，包括短期評(píng)價(jià)（初免與加免間隔14周）和遠(yuǎn)期評(píng)價(jià)（54周），并對(duì)重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)保護(hù)力進(jìn)行評(píng)價(jià);第三部分建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染用疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)豚鼠模型，并且用重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進(jìn)行了驗(yàn)證性評(píng)價(jià)，包括初次評(píng)價(jià)和再次評(píng)價(jià)。
　　一、初免疫苗動(dòng)物評(píng)價(jià)模型建立與評(píng)價(jià)
　　本研究成功建立初免疫苗動(dòng)物保護(hù)力評(píng)價(jià)模型，并且用重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進(jìn)行驗(yàn)證，盡管顯示重組結(jié)核疫苗(AEC/BC

4、02)能一定程度抑制或殺滅結(jié)核分枝桿菌，降低豚鼠臟器的病變程度，減低脾臟的荷菌量，但仍不及我國(guó)卡介苗的預(yù)防保護(hù)效果，因此，重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)不適合作為初免疫苗。
　　二、初免加強(qiáng)型疫苗動(dòng)物評(píng)價(jià)模型建立與評(píng)價(jià)
　　本研究成功建立的初免加強(qiáng)型結(jié)核疫苗保護(hù)力評(píng)價(jià)用動(dòng)物模型，通過(guò)短期評(píng)價(jià)和遠(yuǎn)期評(píng)價(jià)的比較，我們總結(jié)出BCG初免和重組結(jié)核疫苗加強(qiáng)免疫的間隔時(shí)間應(yīng)該適當(dāng)延長(zhǎng)方可體現(xiàn)疫苗的有效性，其中主要原因是國(guó)內(nèi)BCG短期內(nèi)

5、的強(qiáng)有力的保護(hù)力使得重組疫苗的加強(qiáng)免疫效果在短期內(nèi)無(wú)法體現(xiàn)其免疫效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:BCG接種54周后，卡介苗接種后重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)加強(qiáng)免疫組豚鼠的發(fā)病率、豚鼠肝脾肺綜合病變指數(shù)評(píng)分、脾菌分離數(shù)對(duì)數(shù)值、肺菌分離數(shù)對(duì)數(shù)值均低于單純BCG組，其中豚鼠肝脾肺綜合病變指數(shù)評(píng)分和肺菌分離數(shù)對(duì)數(shù)值與單純BCG組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但BCG接種14周后加強(qiáng)免疫結(jié)果顯示加強(qiáng)免疫組和單純BCG組的比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，該結(jié)果提示重組結(jié)核

6、疫苗(AEC/BC02)對(duì)卡介苗接種后遠(yuǎn)期加強(qiáng)免疫可顯著增強(qiáng)卡介苗的免疫效果。
　　三、潛伏感染用疫苗動(dòng)物模型建立與評(píng)價(jià)
　　本文綜合了結(jié)核疫苗的臨床前研究，我們選擇了豚鼠作為模擬結(jié)核分枝桿菌的潛伏感染模型的模式動(dòng)物。在首次評(píng)價(jià)中，我們優(yōu)化了動(dòng)物模型，成功建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染動(dòng)物模型，并用凍干重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)進(jìn)行驗(yàn)證性評(píng)價(jià)。結(jié)果從肝脾肺綜合病變指數(shù)評(píng)分、脾Mtb分離、肺Mtb分離等多個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果綜合

7、分析，顯示凍干重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可有效抑制或殺死豚鼠體內(nèi)潛伏感染的結(jié)核分枝桿菌、減輕豚鼠各臟器的病變程度，對(duì)結(jié)核分枝桿菌潛伏感染豚鼠可起到預(yù)防保護(hù)效果。再次評(píng)價(jià)中我們建立了相同于首次評(píng)價(jià)的動(dòng)物模型，一方面驗(yàn)證了模型的穩(wěn)定性，另一方面也驗(yàn)證了重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可有效抑制或殺死豚鼠體內(nèi)潛伏感染的結(jié)核分枝桿菌、減輕豚鼠各臟器的病變程度，對(duì)結(jié)核分枝桿菌潛伏感染豚鼠可起到預(yù)防保護(hù)效果;在免疫治療上選用重組結(jié)核疫苗(AE

8、C/BC02)6針組的預(yù)防保護(hù)效果優(yōu)于3針組。
　　四、結(jié)論
　　通過(guò)本研究我們成功建立了結(jié)核分枝桿菌潛伏感染保護(hù)力評(píng)價(jià)用豚鼠模型，初免加強(qiáng)結(jié)核疫苗評(píng)價(jià)用豚鼠模型和初免疫苗評(píng)價(jià)豚鼠模型。同時(shí)也通過(guò)結(jié)果證明重組結(jié)核疫苗(AEC/BC02)可以用于潛伏感染動(dòng)物模型的預(yù)防性治療和用于BCG初免豚鼠的加強(qiáng)免疫，不適合用于初免疫苗替代現(xiàn)有BCG。
　　本文主要?jiǎng)?chuàng)新之處主要有以下三點(diǎn):①通過(guò)初免模型的摸索，建立了一套規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化