硫氧還蛋白-1過表達(dá)對高氧所致骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制.pdf

1、目的:
　　體外分離培養(yǎng)大鼠BMSCs，并使用Trx-1基因進(jìn)行修飾后，建立高氧所致BMSCs細(xì)胞損傷模型，研究高氧暴露對Trx-1基因修飾的BMSCs的增殖和凋亡的影響及其可能機(jī)制。
　　方法:
　　在體外條件下對大鼠BMSCs進(jìn)行分離和擴(kuò)增培養(yǎng)，并對其進(jìn)行鑒定。構(gòu)建含有Trx-1基因的慢病毒，并轉(zhuǎn)染第三代BMSCs，以Trx-1基因修飾的BMSCs（BMSCs-Trx-1）為實(shí)驗(yàn)組，以含空載體的病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs

2、（BMSCs-p）和未經(jīng)任何處理的BMSCs為對照組。轉(zhuǎn)染后檢測轉(zhuǎn)染效率，并檢測三組細(xì)胞內(nèi)Trx-1 mRNA和Trx-1蛋白的表達(dá)水平。將上述三種細(xì)胞隨機(jī)分為空氣（room air, RA）組和高氧（hyperoxia, HO）組。兩組細(xì)胞在培養(yǎng)條件上氧濃度分別設(shè)置：前者為21％，后者為95%，兩組細(xì)胞的其他培養(yǎng)條件一致。各組再根據(jù)處理時(shí)間的不同各分為4個(gè)亞組。使用Western blotting法來檢測各組細(xì)胞在高氧條件下細(xì)胞內(nèi)Tr

3、x-1蛋白的表達(dá)水平；CCK-8檢測上述三種細(xì)胞在RA組和HO組的增殖情況；使用流式細(xì)胞儀對各亞組細(xì)胞凋亡率進(jìn)行檢測；使用 Western blotting法來評價(jià)各亞組ASK-1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量；ELISA測定各組培養(yǎng)液中的Trx-1蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1）經(jīng)細(xì)胞表型鑒定，體外成功分離和培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；2）經(jīng)Trx-1基因修飾的BMSCs轉(zhuǎn)染效率可達(dá)87.3±5.7%，Trx-1 mRNA和Tr

4、x-1蛋白在BMSCs-Trx-1細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與BMSCs-p和BMSCs相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；
　　3）在RA組，各亞組細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)的吸光度無明顯差異（P＞0.05）；在HO組，在處理12h后，BMSCs-Trx-1組的吸光度即較另外兩組高，差異均較明顯（P＜0.05）；
　　4）在RA組，在處理相同的時(shí)間后，三種細(xì)胞的凋亡率無明顯差異（P＞0.05）。在HO組，在處理12h后，BMSCs-Trx-1亞

5、組的細(xì)胞凋亡率較另外兩組低，差異均較明顯（P＜0.05）；
　　5）在RA組和HO組，隨著處理時(shí)間的延長，Trx-1蛋白在BMSCs-Trx-1亞組細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)均比BMSCs-p和BMSCs亞組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；
　　6）無論是在RA組還是HO租，在處理相同時(shí)間的情況下，BMSCs-Trx-1培養(yǎng)液中的Trx-1蛋白水平較BMSCs和BMSCs-p亞組高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；
　

6、　7）在RA組，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，在處理相同時(shí)間的情況下，BMSCs-Trx-1亞組細(xì)胞內(nèi)ASK1蛋白表達(dá)水平與BMSCs和BMSCs-p亞組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；在HO組，在處理相同時(shí)間的情況下，BMSCs-Trx-1細(xì)胞內(nèi)的ASK1蛋白表達(dá)水平較BMSCs和BMSCs-p低，差異均較明顯（P＜0.001）。
　　結(jié)論:
　　1、成功建立體外分離與培養(yǎng)BMSCs的方法與體系；
　　2、成功在體外對B

7、MSCs進(jìn)行Trx-1基因修飾，并在BMSCs獲得穩(wěn)定高表達(dá)；
　　3、與BMSCs和BMSCs-p相比，經(jīng)Trx-1基因修飾的BMSCs在高氧條件下增殖增快；
　　4、與BMSCs和BMSCs-p相比，經(jīng)Trx-1基因修飾的BMSCs在高氧條件下凋亡率減少；
　　5、BMSCs-Trx-1細(xì)胞內(nèi)Trx-1蛋白的表達(dá)在RA組和HO組均較對照組高，這可能是Trx-1過表達(dá)對高氧所致BMSCs損傷發(fā)揮保護(hù)作用的可能機(jī)制之一