Omentin與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及2型糖尿病非酒精脂肪肝關(guān)系研究.pdf

1、一、Omentin與2型糖尿病非酒精性脂肪肝的關(guān)系研究。
　　 目的:
　　 本研究通過測定2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus，T2DM)患者中伴或不伴非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的血漿網(wǎng)膜素(omentin)，旨在初步探討網(wǎng)膜素在NAFLD的發(fā)病機(jī)制的作用，進(jìn)而為NAFLD的臨床防治提供新思路。
　　 方法:
　　

2、 選擇2009年7H至2010年1月天津醫(yī)科大學(xué)第三中心醫(yī)院內(nèi)分泌科門診和病房的初發(fā)T2DM患者190例行肝臟B型超聲檢查，按是否伴有非酒精性脂肪肝分為非脂肪肝組即A組(n=102)和脂肪肝組即B組(n=88)，二組受試者均測定身高(H)、體重(kg)、腰圍(WC)、臀圍(HC)，計算體質(zhì)指數(shù)BMI(kg/m2)和腰臀比(WHR)。行口服75g葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)及胰島素、C-肽釋放試驗(yàn)，禁食8小時測定血漿空腹血糖(FBG)、空腹

3、血漿胰島素(Fins)、血脂，2h后抽血測血漿餐后血糖(2hPG)，計算穩(wěn)態(tài)胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR=(FBG×Fins)/22.5。血糖采用葡萄糖氧化酶法測定；血漿胰島素采用放射免疫法測定(試劑由北京原子高科技術(shù)應(yīng)用股份有限公司生產(chǎn))；血脂采用酶法測定(試劑由北京原子高科技術(shù)應(yīng)用股份有限公司提供)；omentin；測定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linded immunosorbent assay，ELISA)(北京愛迪博

4、生物有限公司)；B超檢查用MYLAB30型B超診斷儀。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用方差分析，組間采用q檢驗(yàn)，關(guān)系判定采用Spearman相關(guān)分析和logistic回歸分析，受試者工作特征曲線(ROC)曲線確立風(fēng)險值，卡方檢驗(yàn)計算OR值。以P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 臨床實(shí)驗(yàn)室資料比較除性別、年齡、BMI及HDL-C外，其余各項(xiàng)因素均存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，與A組比較，B組

5、的omentin水平明顯降低(P<0.05)。
　　 Spearman相關(guān)分析在T2DM患者中血漿omentin水平與InFins、InHOMA-IR、WC、FBG、2hPG呈負(fù)相關(guān)(均P<0.01)，與HDL-C呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 Logistic回歸分析在T2DM患者中以脂肪肝有無(無脂肪肝為0，有脂肪肝為1)為因變量，各項(xiàng)相關(guān)因素為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示omentin、HOMA-

6、IR是發(fā)生脂肪肝的影響因素。
　　 Omentin預(yù)測脂肪肝的風(fēng)險值B超作為脂肪肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)，作出omentin和脂肪肝的ROC曲線圖，在曲線上取靈敏度+特異度之和最大值點(diǎn)(靈敏度為52.3％，特異度92.2％)的omentin值(40ng/ml)作為預(yù)測2型糖尿病患者脂肪肝的風(fēng)險值。根據(jù)其風(fēng)險值將190例患者分為omentin>40ng/ml組和omentin<40ng/ml組，與脂肪肝作卡方檢驗(yàn)。
　　 結(jié)論:

7、>　　 血清omentin與非酒精性脂肪肝密切相關(guān)，可能影響T2DM患者NAFLD的發(fā)生發(fā)展。
　　 二、網(wǎng)膜素干預(yù)油酸誘導(dǎo)脂肪變肝細(xì)胞的影響。
　　 目的:
　　 本研究通過網(wǎng)膜素(omentin)干預(yù)油酸誘導(dǎo)體外培養(yǎng)脂肪變肝細(xì)胞，旨在闡明網(wǎng)膜素在NAFLD的發(fā)病機(jī)制及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，進(jìn)而為NAFLD的臨床防治提供新靶點(diǎn)。
　　 方法:
　　 采用正常成人HL-7702肝細(xì)胞株，隨機(jī)分為3組。

8、A組：正常對照組；B組：油酸誘導(dǎo)組，正常培養(yǎng)基加油酸進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；C組：油酸聯(lián)合網(wǎng)膜素組，正常培養(yǎng)基加油酸及網(wǎng)膜素進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。采用油酸誘導(dǎo)HL-7702肝細(xì)胞株建立肝細(xì)胞脂肪變模型，采用油紅O染色觀察各組肝細(xì)胞脂滴變化的情況，采用ELISA法檢測各組GRP78(Glucose regulated protein78，GRP78)、XBP-1(X-box bindingprotein1，XBP-1)、apoB100(Apolipopro

9、tein B100，apoB100)。采用生化試劑盒檢測各組肝細(xì)胞內(nèi)TG的水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、油酸可誘導(dǎo)HL-7702肝細(xì)胞株脂肪變性，能建立肝細(xì)胞脂肪變細(xì)胞模型。
　　 2、各組肝細(xì)胞GRP78含量的比較
　　 培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后，對照組各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與正常對照組相比，模型組GRP78蛋白表達(dá)24小時升高，72小時達(dá)高峰，比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0

10、.05)。干預(yù)組C1、C2、C3GRP78蛋白表達(dá)較模型組有所下降，72小時比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。隨著時間延長，C1組GRP78表達(dá)呈上升的趨勢，各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，C2、C3組72小時GRP78開始下降(P>0.05)。C1組、C2組、C3組各時相點(diǎn)GRP78表達(dá)有下降趨勢，各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3、各組肝細(xì)胞XBP-1含量的比較。
　　 培養(yǎng)24小時、48

11、小時、72小時后，對照組各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與正常對照組相比，模型組與干預(yù)組XBP-1蛋白表達(dá)升高，比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，干預(yù)組C1、C2、C3 XBP-1表達(dá)較模型組有所下降(P>0.05)，隨著時間延長，C1、C2組XBP-1表達(dá)呈上升的趨勢，各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。C3組72小時XBP-1開始下降，各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。C1組、C2組、C3組各時相點(diǎn)XBP-

12、1表達(dá)有下降趨勢，各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4、各組肝細(xì)胞apoB100含量的比較。
　　 培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后，對照組各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，隨著時間的延長，模型組與干預(yù)組apoB100表達(dá)呈下降的趨勢，各時相點(diǎn)比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比，干預(yù)組C1、C2、C3各時相點(diǎn)apoB100表達(dá)上升，比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。干預(yù)組C1、C2、

13、C3各時相點(diǎn)比較apoB100含量有升高的趨勢，比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 5、各組肝細(xì)胞TG含量的比較
　　 培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后，對照組A組各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，模型組B組各時相點(diǎn)比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，干預(yù)組各時相點(diǎn)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與正常對照組相比，模型組、干預(yù)組C1、C2、C3各時相點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)TG含量均逐漸增高(P<0.05)，模型組與干預(yù)