MiRNA-451在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與多藥耐藥關(guān)系研究.pdf

1、目的：化療在中晚期結(jié)直腸癌(colorectal cancer, CRC)患者的治療過(guò)程中有著不可替代的作用，然而臨床治療過(guò)程中數(shù)次化療后出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)成為導(dǎo)致治療失敗的主要原因之一。目前研究揭示了一些可能的機(jī)制導(dǎo)致結(jié)直腸癌細(xì)胞MDR的產(chǎn)生，這些研究大部分集中在關(guān)于多藥耐藥基因1(multidrug resistance gene1，MDR1)和P-糖蛋白(P-glycopro

2、tein,P-gp，在MDR相關(guān)因子中，P-gp的藥物外排途徑是目前認(rèn)為導(dǎo)致腫瘤MDR的最重要機(jī)制）的高表達(dá)。尋找抗腫瘤治療的新策略與方法正在向microRNA等新近發(fā)現(xiàn)發(fā)面轉(zhuǎn)移，以期克服腫瘤的復(fù)發(fā)、難治、耐藥等問(wèn)題。microRNAs是一類(lèi)微小的、內(nèi)源性的、非編碼的單鏈RNA，其可通過(guò)對(duì)信使RNA的降解或抑制其他翻譯過(guò)程來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)。在很多實(shí)體腫瘤中一些microRNAs有著異常水平的表達(dá)，并且展示了其在腫瘤診斷、治療、預(yù)后判斷方面

3、所起到的重要作用?，F(xiàn)有研究表明， microRNA-451在人結(jié)直腸癌腫瘤組織中存在著異常水平的表達(dá)，且microRNA-451表達(dá)水平的變化對(duì)人結(jié)直腸癌細(xì)胞株的增殖、侵襲等生物行為有顯著影響，但目前鮮有關(guān)于microRNA-451在結(jié)直腸癌組織與細(xì)胞中表達(dá)水平的改變同MDR1/P-gp途徑介導(dǎo)的多藥耐藥之間關(guān)系的報(bào)道。因此，本研究旨在檢測(cè)microRNA-451、P-gp蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)并分析其相關(guān)性，進(jìn)一步于體外實(shí)驗(yàn)探索m

4、icroRNA-451在MDR1/P-gp途徑介導(dǎo)的多藥耐藥中的作用。
　　方法：于胃腸外科手術(shù)室收集術(shù)中切除的新鮮結(jié)直腸癌及癌旁組織。采用Real time qPCR（RT-qPCR）檢測(cè)microRNA-451表達(dá)水平，蛋白印跡技術(shù)檢測(cè) P-gp表達(dá)情況，并分析其相關(guān)性。檢測(cè)比較microRNA-451在結(jié)直腸癌耐奧沙利鉑細(xì)胞 HCT116/Oxaliplatin（HCT116/L-OHP）、耐阿霉素細(xì)胞LoVo/Adriam

5、ycin（LoVo/adr）與相應(yīng)敏感細(xì)胞中的差異表達(dá)。采用 Lipofectamine2000脂質(zhì)體將microRNA-451模擬物及空白R(shí)NAs轉(zhuǎn)染上述耐藥細(xì)胞后，RT-qPCR和蛋白印跡檢測(cè)比較MDR1 mRNA、P-gp蛋白的表達(dá)情況；MTT比色法檢測(cè)耐藥細(xì)胞不同轉(zhuǎn)染后在不同濃度奧沙利鉑或阿霉素下的增殖，計(jì)算其半數(shù)抑制濃度IC50值；流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)比較耐藥細(xì)胞不同轉(zhuǎn)染后在同一濃度奧沙利鉑或

6、阿霉素下的凋亡率。
　　結(jié)果：與癌旁組織相比，microRNA-451在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)下調(diào)約43.12％，其低表達(dá)與癌組織中 P-gp的陽(yáng)性表達(dá)有相關(guān)性(r=-0.404,P=0.002)；與2組親本敏感細(xì)胞株相比，microRNA-451在耐藥細(xì)胞中明顯低表達(dá)，下調(diào)約5倍（P＜0.001）。microRNA-451模擬物轉(zhuǎn)染HCT116/L-OHP與LoVo/adr耐藥細(xì)胞后，MDR1 mRNA表達(dá)水平較空白轉(zhuǎn)染組分別下降（

7、39±24）%與（37±25）%（均P＜0.05）；在“HCT116/L+模擬物”組中P-gp相對(duì)表達(dá)量為（45±15）%，與空白組(85±13）%相比，下降約47%，在“LoVo/adr+模擬物”組中P-gp相對(duì)表達(dá)量為（51±18）%，與空白組（89±7）%相比，下降約43%（均P＜0.05）。在空白轉(zhuǎn)染組中，L-OHP對(duì)HCT116/L的IC50值（μg/ml）為138.04±2.21，而在模擬物轉(zhuǎn)染組中為72.39±1.84；A

8、dr對(duì)LoVo/adr的半數(shù)抑制濃度在空白組及模擬物轉(zhuǎn)染組分別為2.09±0.14與1.36±0.19，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。HCT116/L細(xì)胞凋亡率在空白轉(zhuǎn)染組及模擬物轉(zhuǎn)染組分別為：(38.81±5.27)%，(70.38±7.43)%，LoVo/adr細(xì)胞凋亡率在空白轉(zhuǎn)染組及模擬物轉(zhuǎn)染組分別為：(40.80±4.49)%，(67.88±5.53)%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.01)。
　　結(jié)論：在結(jié)直腸癌