功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠對IL-1β致大鼠髓核細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　1.探究在體外條件下白細胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)對大鼠髓核細胞的凋亡誘導作用；
　　2.探究修飾有骨形態(tài)發(fā)生蛋白質-7(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)在體外條件下能否抑制IL-1β對大鼠髓核細胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)的凋亡誘導作用。
　　方法：<

2、br>　　體外分離培養(yǎng)SD大鼠的NPCs，取第3代NPCs分別在無BMP-7功能片段的RADA16-I或修飾有BMP-7功能片段的RADKPS中培養(yǎng)，然后加入IL-1β對大鼠髓核細胞進行凋亡誘導。試驗共分3組：A組（無IL-1β干預的RADA16-I組）、B組（有IL-1β干預的RADA16-I組）、C組（有IL-1β干預的RADKPS組）。凋亡誘導48小時后，分別通過CCK-8法及DAPI染色檢測各組細胞增殖能力；通過Calcein-

3、AM/PI雙染觀察各組細胞活性；分別通過DAPI染色和TUNEL熒光染色觀察各組細胞凋亡情況；通過RT-PCR檢測各組凋亡相關基因的相對表達量，即自殺相關因子(Factor Associated Suicide,Fas),自殺相關因子配體(The Ligand of Factor Associated Suicide,FasLg),B細胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相關X蛋白(Bcl-2 As

4、sociated X Protein, Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-3)；通過RT-PCR檢測各組細胞外基質相關基因的相對表達量，即蛋白多糖(Aggrecan，AGG)，II型膠原(Collagen type II,COLII)和人性別決定區(qū)Y框蛋白9(Sex determining region Y-box9,SOX-9)

5、；通過Caspase-3和Caspase-9活性試劑盒檢測各組中Caspase-3和Caspase-9的活性。
　　結果：
　　1.細胞增殖能力：B組及C組中細胞的增殖能力較對照組A組均明顯降低（P<0.05），同時C組中細胞的增殖能力明顯高于B組（P<0.05）；
　　2.細胞活性（Calcein-AM/PI雙染）:B組及C組中死細胞所占的比例均明顯高于較對照組A組（P<0.05），同時C組中死細胞所占的比例明顯低于

6、B組（P<0.05）；
　　3.細胞凋亡（TUNEL染色）:B組及C組中凋亡細胞所占的比例均明顯高于對照組A組（P<0.05），同時C組中凋亡細胞所占的比例明顯低于B組（P<0.05）；
　　4.凋亡相關基因的mRNA相對表達量：B組及C組中促進凋亡的基因Fas,Bax及Caspase-3的mRNA相對表達量均明顯高于對照組A組（P<0.05），同時C組中三者的mRNA相對表達量均明顯低于B組（P<0.05）；B組及C組中抗

7、凋亡的基因Bcl-2的mRNA的相對表達量均明顯低于對照組A組（P<0.05），同時C組中Bcl-2的mRNA相對表達量明顯高于B組（P<0.05）；三組之間的FasLg的mRNA相對表達量均無明顯差異（P>0.05）；
　　5.細胞外基質相關基因的相對表達量：B組及C組中AGG、COLII和SOX-9的mRNA的相對表達量均明顯低于對照組A組（P<0.05），同時C組中三者mRNA的相對表達量均明顯高于B組（P<0.05）；

8、r>　　6. Caspase-3和Caspase-9的活性：B組及C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯高于對照組A組（P<0.05），同時C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯低于B組（P<0.05）。
　　結論：
　　本實驗在體外條件下初步探索了IL-1β所誘導的SD大鼠髓核細胞凋亡的主要機制可能是經Fas介導的線粒體參與的II型凋亡途徑，同時修飾有BMP-7功能片段的功能化自組裝多肽