白刺鏈霉菌(Streptomyces albospinus)CT205活性成分的分離純化及其對草莓根腐病的生防效應研究.pdf

1、農用抗生素是由微生物產生的用于防治農業(yè)有害生物的次級代謝產物，放線菌作為農業(yè)微生物的重要類群，約有70％的抗生素是由放線菌產生的，其次生代謝產物是農用抗生素的重要來源。草莓根腐病(strawberry root rot)是一種由多種病原微生物所引起的土傳病害，通過病原微生物侵染草莓根部發(fā)病，導致根部腐爛，葉片萎蔫，最終造成整株枯死，嚴重制約了草莓栽培行業(yè)的發(fā)展。通過生物防治的方法來控制草莓根腐病是目前研究的熱點。白刺鏈霉菌(Strept

2、omyces albospinus)CT205是實驗室保存的一株拮抗放線菌，具有較強的抗菌效果和廣泛的抗菌譜。本論文以S.albospinusCT205為材料，首先對其液體發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行優(yōu)化，然后對發(fā)酵液中的活性成分進行分離純化及檢測，之后對其固體發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化，制備生防制劑，最后通過盆栽及田間試驗探究了S.albospinus CT205液體發(fā)酵菌劑和固體發(fā)酵菌劑對草莓根腐病的生防效應。研究結果如下:
　　采用單因

3、素實驗和正交實驗相結合的方法，以啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作為指示菌，對發(fā)酵液的抗菌活性進行檢測,并佐以菌濃度作為優(yōu)化指標，對白刺鏈霉菌CT205發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。最終獲得優(yōu)化配方:蔗糖2.0％，可溶性淀粉3.0％，蛋白胨0.2％，黃豆粉0.8％，MgSO4.7H2O0.05％， K2HPO4·3H2O0.05％，NaCL0.2％，CaCO30.3％;最佳發(fā)酵條件為:初始pH8.0，發(fā)酵溫

4、度為28℃～30℃，接種量10％，裝液量為100 mL/500 mL。
　　采用薄層層析法對發(fā)酵液中的活性成分進行初步分離，并經生物檢測發(fā)現，發(fā)現組分4對啤酒酵母(S.cerevisiae)和草莓根腐病病原菌（Fusarium oxysporum）Y3具有抗菌活性，Rf值為0.68。進一步對組分4全波長紫外掃描發(fā)現，該活性物質在258nm處有一強紫外吸收峰。采用高效液相色譜儀對組分4進行純化，獲得了一種具備抗菌活性的白色晶體物質。

5、通過對該物質進行一級質譜分析，推測其分子量可能為273.2、317.2和436.1。
　　通過對菌株CT205固體發(fā)酵配方的優(yōu)化，得到優(yōu)化配方:蚯蚓糞∶麥麩(W∶W)=1∶1，料水比(V∶V)=1∶0.8，28℃，淺盤固體發(fā)酵4-6天，獲得CT205生防制劑，孢子數量達到3.02×109 CFU·g-1。將此制劑用于草莓盆栽及田間試驗研究。
　　在南京郊區(qū)麒麟鎮(zhèn)進行了草莓盆栽試驗，結果表明:單獨施用CT205液體菌劑和固體制

6、劑對草莓根腐病的防治效果分別達78.57％和88.10％，同時對各處理的生物量、植物酶活和土壤酶活進行測定發(fā)現，無論是CT205液體菌劑還是其固體制劑對草莓均具有顯著的促生作用;并且單獨施用CT205液體菌劑和固體制劑時植物過氧化氫酶(CAT)分別為115.45 U·g-1和471.54 U·g-1，分別是對照的24倍和98倍，超氧化物歧化酶(SOD)分別為490.52 U/g和481.77 U/g，比對照處理高5.03％和3.16％;