氫醌誘導(dǎo)人外周血淋巴細(xì)胞毒作用及2-Cys Prxs表達(dá)水平的研究.pdf

1、氫醌(hydroquinone，HQ)廣泛存在于自然界，是工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中常用的化學(xué)物，同時氫醌也是苯在體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物之一。國內(nèi)外有關(guān)HQ毒性的研究包括遺傳毒性、血液毒性、腎毒性、神經(jīng)毒性、細(xì)胞毒性等，其中血液毒性尤為關(guān)注。2Cys巰基還蛋白過氧化物酶(2-Cys Peroxiredoxins，2-Cys Prxs)屬于抗氧化酶的家族成員，其主要功能是抗氧化和調(diào)節(jié)過氧化氫介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，還參與細(xì)胞周期進(jìn)程以及發(fā)揮分子伴侶作用等。課題

2、組前期研究發(fā)現(xiàn)在人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5中，HQ的毒性可能與2-CysPrxs有關(guān)，為進(jìn)一步探討HQ的血液毒性與2-Cys Prxs間的關(guān)系，本課題進(jìn)行如下研究。
　　 目的：探討HQ對人外周血淋巴細(xì)胞毒性作用；探討HQ對2-Cys Prxs各成員表達(dá)的影響。
　　 方法：取正常人新鮮外周血，分離人外周血淋巴細(xì)胞。
　　 ①給予0、1、5、50μmol/L HQ刺激24小時后，AnnexinV-PI雙染色法經(jīng)流

3、式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，實時熒光定量PCR測定2-Cys Prxs各成員的表達(dá)變化。
　　 ②以10μg/ml植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)作為淋巴細(xì)胞增殖刺激因子，同時給予0、1、5、50μmol/L HQ處理24小時，CCK-8法(Cell Counting Kit-8)經(jīng)酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞增殖情況；ELASA法檢測培養(yǎng)液上清TNF-α、IFN-γ、IL-17等細(xì)胞因子含量；實時熒光定量PCR測定2-C

4、ys Prxs各成員的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.與對照組比較，HQ濃度大于5 μmol/L時，隨著濃度增加，淋巴細(xì)胞存活率逐漸降低(P＜0.01)，當(dāng)HQ濃度為5μmol/L時早期凋亡率明顯升高(P＜0.05)，HQ濃度為50 μmol/L時，早期凋亡率下降，晚期凋亡和死亡率升高(P＜0.01)。
　　 2.隨著HQ濃度的增加，各HQ+PHA組細(xì)胞增殖抑制率與PHA組比較逐漸增高(P＜0.01)。

5、>　　 3.PHA組TNF-α、IFN-γ IL-17的含量與對照組比較有增加的趨勢，其中IFN-γ含量明顯增高，有顯著差異(P＜0.05)。隨著HQ濃度增加，各HQ+PHA組TNF-α、IFN-γ、IL-17的含量與PHA組比較有逐漸減少的趨勢，50μmol/LHQ+PHA組TNF-α、IFN-γ、IL-17的含量顯著減少(P＜0.05)。
　　 4.與對照組比較，隨著HQ濃度的增加，PrxⅡ、PrxⅢ、PrxⅣ的表達(dá)水平均

6、有增高的趨勢，當(dāng)HQ染毒濃度為50μmol/L時，PrxⅡ的相對表達(dá)量與對照組比較明顯增加(P＜0.05)，各組中PrxⅠ的相對表達(dá)量均無明顯差異。PHA組PrxⅡ和PrxⅣ基因表達(dá)水平有降低的趨勢，PrxⅢ的表達(dá)水平有增高的趨勢，但未見統(tǒng)計學(xué)差異。與PHA組比較，隨著HQ濃度增加，各HQ+PHA組PrxⅡ、PrxⅢ表達(dá)水平有增加的趨勢，當(dāng)HQ濃度為50μmol/L時，PrxⅢ的相對表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)，各組中PrxⅠ的相對表