建蘭離體培養(yǎng)與形態(tài)發(fā)生特征研究.pdf

1、建蘭（Cymbidium ensifolium）又名劊蕙、四季蘭，是蘭屬地生蘭的一種。因株型好、易管理等特點(diǎn)，也常被用作綠化、美化。但地生蘭授粉后其種子在自然條件下很難發(fā)育成熟，繁殖系數(shù)低。且隨著生活品質(zhì)不斷提高，人們對(duì)觀(guān)賞植物的性狀要求越來(lái)越多元化，因此加快培育新品種成為一種迫切需求。無(wú)論是將植物進(jìn)行工廠(chǎng)化規(guī)?；a(chǎn)還是利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段加快植物性狀改變，都需要一個(gè)穩(wěn)定、完整的再生體系為基礎(chǔ)。因此本研究將利用由建蘭成熟蒴果經(jīng)無(wú)菌萌發(fā)

2、形成的根狀莖為材料，從根狀莖生長(zhǎng)、莖段分化出芽、無(wú)根苗生根三方面展開(kāi)討論，此外，利用石蠟切片技術(shù)對(duì)建蘭器官形態(tài)建成過(guò)程中細(xì)胞變化進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察，并找出適合建蘭無(wú)菌苗快速生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)條件，為建蘭工廠(chǎng)化、規(guī)?；L(zhǎng)及新品種培育提供理論、技術(shù)參考。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以發(fā)育成熟的建蘭種子經(jīng)無(wú)菌萌發(fā)形成的根狀莖為材料，研究了基本培養(yǎng)基、生長(zhǎng)素、有機(jī)添加物、碳源及蔗糖含量及培養(yǎng)方式對(duì)其根狀莖生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明:建蘭根狀莖生長(zhǎng)的最

3、適培養(yǎng)基為1/2 MS+1.2 mg·L-1 NAA+0.4 mg·L-16-BA+50.0 g·L-1香蕉泥+30.0 g·L-1蔗糖+5.0 g·L-1瓊脂+1.0 g·L-1 AC，pH5.4。椰汁有利于根狀莖莖端分化，對(duì)根狀莖的增殖生長(zhǎng)無(wú)顯著促進(jìn)作用。在碳源比較中，30.0 g·L-1麥芽糖效果最佳，但在同等質(zhì)量濃度下蔗糖作用雖然稍差，差異卻不顯著，因此考慮成本，宜選用蔗糖為碳源。培養(yǎng)方式以液-固交替培養(yǎng)最好。
　　2.以

4、建蘭根狀莖及根狀莖分化后形成的建蘭無(wú)根苗為材料，研究了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、AC、光照條件對(duì)根狀莖分化以及基本培養(yǎng)基、生長(zhǎng)素、有機(jī)添加物、pH對(duì)建蘭無(wú)根苗生根的影響。結(jié)果表明:建蘭根狀莖分化的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+4.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1 KT+0.2 mg·L-1 NAA+100.0 ml·L-1椰汁+30.0g·L-1蔗糖+1.0g·L-1 AC+5.0 g·L-1瓊脂，pH5.5。最適的生根培養(yǎng)基為1/2

5、MS+1.0 mg·L-1 NAA+30.0 g·L-1蔗糖+1.0 g·L-1 AC+5 g·L-1瓊脂，pH5.5。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)光照是建蘭根狀莖分化的必要條件，且根狀莖單生的頂端芽體飽滿(mǎn)，后期發(fā)育狀態(tài)好。在培養(yǎng)基中不添加AC會(huì)促進(jìn)根狀莖分化，但已形成的叢生芽后期往往不能正常成苗，出現(xiàn)黃化甚至死亡。所以適當(dāng)添加AC有利于頂芽的正常生長(zhǎng)直至成苗。在生根試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)NAA對(duì)建蘭無(wú)根苗生根至關(guān)重要，濃度過(guò)低或過(guò)高不利，培養(yǎng)基pH的調(diào)節(jié)也對(duì)生根造

6、成顯著影響，培養(yǎng)基以滅菌前pH5.5為宜。
　　3.通過(guò)對(duì)建蘭增殖后根狀莖、分化狀態(tài)下的根狀莖以及生根的根狀莖進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察，發(fā)現(xiàn):離體培養(yǎng)下的建蘭根狀莖已具有根的特征，有表皮、皮層和中柱。根狀莖側(cè)生細(xì)胞突起后會(huì)朝兩個(gè)方向繼續(xù)發(fā)展:一是長(zhǎng)出側(cè)生分枝，繼續(xù)進(jìn)行根狀莖生長(zhǎng);二是形成分生組織，分化成芽。莖頂端分生組織分化形成芽的過(guò)程符合原套-原體學(xué)說(shuō)，最終出現(xiàn)帶狀葉的形態(tài)。建蘭無(wú)根苗氣生根的產(chǎn)生則是激發(fā)根狀莖內(nèi)部中柱及其它特定細(xì)胞經(jīng)平周

7、分裂后產(chǎn)生根原始體細(xì)胞，根原始體細(xì)胞進(jìn)一步伸長(zhǎng)成為根原基，根原基通過(guò)伸長(zhǎng)向表皮擴(kuò)張和突破，最終形成不定根。
　　4.以建蘭生根無(wú)菌苗為材料，研究了基本培養(yǎng)基、GA3、有機(jī)添加物、三角瓶規(guī)格、搖床轉(zhuǎn)速對(duì)液體培養(yǎng)中建蘭幼苗生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明:1/2MS是建蘭無(wú)菌苗生長(zhǎng)的最佳基本培養(yǎng)基;GA3能顯著促進(jìn)建蘭幼苗的伸長(zhǎng)，但濃度過(guò)高（≧0.3 mg·L-1）會(huì)出現(xiàn)建蘭葉片狹長(zhǎng)，植株徒長(zhǎng)現(xiàn)象。椰汁利于建蘭無(wú)菌苗根的生長(zhǎng)，但根系活力無(wú)顯著差異