莪術(shù)油中促進血管生存活性物質(zhì)的篩選、作用機制及安全性研究.pdf

1、目的：篩選莪術(shù)油中促進血管生成的活性物質(zhì)，追蹤有效物質(zhì)至單體成分，初步研究其作用機制，并研究莪術(shù)油中各分離物質(zhì)的安全性，為臨床用藥提供初步的依據(jù)。
　　 方法：采用斑馬魚生物模式，以斑馬魚體節(jié)間血管生成數(shù)量和形態(tài)為指標，應(yīng)用現(xiàn)代分離技術(shù)，對莪術(shù)油中促進血管生成的有效成分進行追蹤分離；并用仔魚切尾實驗、成魚剪尾實驗進行活性驗證；運用現(xiàn)代譜學(xué)技術(shù)對有效成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。采用噻唑藍(MTT)比色法測血管內(nèi)皮細胞增殖、ELISA法測定細

2、胞中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量；相對熒光定量PCR法檢測仔魚切尾后體內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子VEGFA及受體VEGFR2基因的表達。觀察記錄莪術(shù)油中不同分離物質(zhì)對斑馬魚胚胎發(fā)育畸形、孵化率、心率、自主運動次數(shù)、孵化后仔魚泳速以及仔魚體重的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、篩選出莪術(shù)油中分離得到的組份6具促進血管生成活性，并追蹤至單體成分，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為莪術(shù)醇。莪術(shù)醇對血管內(nèi)皮細胞的增殖、血清中VEGF的含量均無顯著影響(P＞

3、0.05)；莪術(shù)醇使仔魚切尾后再生加快(P＜0.01)，能升高仔魚體內(nèi)與血管生成主要相關(guān)的VEGFA及VEGFR2基因的表達量(P＜0.05)，但高濃度時切尾后的仔魚發(fā)生色素沉著、游囊關(guān)閉，EC50值為20.98mg·L-1，影響仔魚尾部再生；在莪術(shù)醇的作用下，斑馬魚成魚剪尾后血管再生密度大，且子代胚胎正常孵化、無畸形。
　　 2、莪術(shù)油的各分離物質(zhì)中，組份1、組份2、組份3、組份4、組份5、組份6、組份7、化合物6-1、莪術(shù)醇

4、對斑馬魚胚胎孵育120h時(120hpf)的LD50值分別為553.05mg·L-1、38.21mg·L-1、596.83mg·L-1、67.17mg·L-1、95.40mg·L-1、26.83mg·L-1、59.10mg·L-1、78.23mg·L-1、42.47mg·L-1，其中組份2、組份6、組份7可引起心包囊腫，EC50(96hpf)值分別為43.62mg·L-1、24.86mg·L-1、30.51mg·L-1;組份5、化合物6

5、-1、莪術(shù)醇可引起身體彎曲，EC50(96hpf)值分別為30.05mg·L-1、117.45mg·L-1、51.68mg·L-1;組份1、組份2、組份3、組份4、組份5、組份6、組份7、莪術(shù)醇對斑馬魚胚胎的孵化率有抑制效應(yīng)。低濃度莪術(shù)醇使斑馬魚自主運動次數(shù)增多(P＜0.01)，但隨著試藥濃度升高抑制自主運動。斑馬魚胚胎孵育36h到72h，莪術(shù)醇使心率下降，且52h時各濃度組均有極顯著影響(P＜0.01)。斑馬魚胚胎孵育至120h時，在