Bcl-2和c-kit蛋白在人薄子宮內(nèi)膜增殖晚期的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、背景及意義：
　　 輔助生育技術(shù)中(ART)與妊娠率密切相關(guān)的兩個(gè)因素是胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜容受性。近年來ART技術(shù)飛速發(fā)展，胚胎實(shí)驗(yàn)室技術(shù)不斷改進(jìn)，卵子受精率及優(yōu)質(zhì)胚胎率均得到很大提高，但體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率仍徘徊在40～50％左右。因此，越來越多的學(xué)者開始關(guān)注如何提高子宮內(nèi)膜容受性的問題。臨床研究表明，子宮內(nèi)膜厚度與胚胎著床率具有顯著相關(guān)性。子宮內(nèi)膜厚度可以反映子宮內(nèi)膜的功能狀態(tài)，預(yù)測子宮內(nèi)膜的容受性。一

2、定厚度的子宮內(nèi)膜是胚胎植入的必要條件，是決定生育的重要因素。目前，薄子宮內(nèi)膜尚無明確診斷標(biāo)準(zhǔn)，但多數(shù)文獻(xiàn)將黃體中期子宮內(nèi)膜厚度＜7mm者稱為薄子宮內(nèi)膜。在IVF周期中薄子宮內(nèi)膜患者較為常見，但其胚胎著床率較低，因此被認(rèn)為是胚胎著床失敗的關(guān)鍵因素之一。薄子宮內(nèi)膜在IVF周期中意味著被迫冷凍胚胎和反復(fù)取消周期的概率增加，給患者帶來了巨大的心理壓力及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
　　 細(xì)胞增殖發(fā)育需要充足的養(yǎng)分，因此子宮內(nèi)膜下豐富的血液供應(yīng)是子宮內(nèi)膜生

3、長的重要條件。臨床上治療薄子宮內(nèi)膜除了給予雌激素促進(jìn)內(nèi)膜增生外，還給予小劑量阿司匹林、枸櫞酸西地那非等藥物，通過改善局部血液灌注來增加子宮內(nèi)膜厚度，但是治療效果不佳，甚至有些患者對藥物治療無反應(yīng)。并且這些藥物在使用的同時(shí)還帶來一些副作用。因此，對薄子宮內(nèi)膜的治療存在較多爭議，甚至有學(xué)者不建議使用這些藥物。而有的臨床研究認(rèn)為在IVF周期中子宮內(nèi)膜厚度改變與雌激素濃度增高無關(guān)，且不同厚度內(nèi)膜下血流可能并無差異。這些研究提示除雌激素及血流影響

4、以外還存在有其它影響子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖發(fā)育的因素。
　　 有學(xué)者通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜中存在有凋亡，并且發(fā)現(xiàn)凋亡小體的出現(xiàn)與子宮內(nèi)膜周期性變化一致，提出凋亡調(diào)控子宮內(nèi)膜周期性改變的觀點(diǎn)。子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖與凋亡失衡可能導(dǎo)致疾病的發(fā)生。凋亡相關(guān)因子中Bcl-2和c-kit與卵巢激素水平相關(guān)，在子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖、凋亡過程中起到重要作用。而這些因子同時(shí)也是子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的標(biāo)志物，一定程度上可以反映子宮內(nèi)膜干細(xì)胞的增殖能力。這些研究為探討

5、薄子宮內(nèi)膜的發(fā)病機(jī)制及臨床治療提出了新的理論指導(dǎo)。但目前尚無從細(xì)胞增殖與凋亡的角度來研究薄子宮內(nèi)膜的報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過研究鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心薄子宮內(nèi)膜（內(nèi)膜厚度＜7mm）患者增殖晚期子宮內(nèi)膜中Bcl-2和c-kit的表達(dá)及相關(guān)性，為研究提高子宮內(nèi)膜厚度，以改善子宮內(nèi)膜容受性及輔助生殖技術(shù)妊娠率提供理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 通過檢測Bcl-2和c-kit在人薄子宮內(nèi)膜增殖晚期的定位與表達(dá)，

6、闡釋薄子宮內(nèi)膜中Bcl-2和c-kit表達(dá)及相關(guān)性，為研究薄子宮內(nèi)膜的病因，提高子宮內(nèi)膜厚度，改善子宮內(nèi)膜容受性及輔助生殖技術(shù)妊娠率提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 于2012年9月至2013年1月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診并準(zhǔn)備接受輔助生育技術(shù)的不孕癥患者40例。根據(jù)子宮內(nèi)膜厚度將患者分為兩組:正常厚度子宮內(nèi)膜組（內(nèi)膜厚度＞8mm，＜14mm，n=20），薄子宮內(nèi)膜組（內(nèi)膜厚度＜7mm，n=20），

7、所有患者月經(jīng)周期正常（28-35天），近三個(gè)月無甾體類激素使用史，宮腔鏡檢查正常，于增殖晚期（月經(jīng)周期第11-12天）取子宮內(nèi)膜組織，生理鹽水沖洗后取部分投入95％酒精固定后送常規(guī)病理檢查，剩余組織分為兩份，一份做石蠟切片，HE染色，免疫組化法測定Bcl-2和c-kit的表達(dá)，一部分行Westernblot進(jìn)行定量分析。采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.Bcl-2陽性細(xì)胞呈

8、棕褐色均質(zhì)狀，在增殖晚期子宮內(nèi)膜腺細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，以腺細(xì)胞為主，位于細(xì)胞漿內(nèi)。免疫組化及Western blot結(jié)果均顯示在正常子宮內(nèi)膜和薄子宮內(nèi)膜中均檢測到Bcl-2，但實(shí)驗(yàn)組Bel-2在子宮內(nèi)膜的相對表達(dá)量顯著低于對照組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.c-kit陽性細(xì)胞呈棕褐色或棕黃色，在子宮內(nèi)膜的腺細(xì)胞胞膜和胞漿中表達(dá)，以胞膜為主，胞漿中少量表達(dá)，子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中偶見點(diǎn)狀表達(dá)。免疫組化及Wester

9、n blot結(jié)果均顯示在正常子宮內(nèi)膜和薄子宮內(nèi)膜中均檢測到c-kit，但實(shí)驗(yàn)組c-kit在子宮內(nèi)膜的表達(dá)顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3.薄子宮內(nèi)膜組及正常子宮內(nèi)膜組中Bcl-2與c-kit表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系(分別r=0.883,P=0.000;r=0.906,P=0.000)
　　 結(jié)論：
　　 1.薄子宮內(nèi)膜組中Bcl-2表達(dá)顯著下降，說明薄子宮內(nèi)膜組子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡抑制能力下降，