川芎嗪對實驗性潰瘍性結(jié)腸炎NF-kB-COX-2信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　本實驗主要通過檢測實驗性結(jié)腸炎經(jīng)川芎嗪治療前后NF-kB/COX-2信號通路的變化，研究潰瘍性結(jié)腸炎經(jīng)川芎嗪治療前后疾病相關(guān)評價指標的變化，說明川芎嗪治療作用同時探求其在潰瘍性結(jié)腸炎治療中發(fā)揮作用的途徑。
　　方法：
　　1.實驗動物分組及制備UC模型
　　5％葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate sodium，簡稱DSS)口飼法制備小鼠UC模型。隨機將實驗動物分為：N組(正常對照組)，M組(

2、UC模型組)，Y組(生理鹽水治療的潰瘍性結(jié)腸炎治療對照組)以及Z組(給予川芎嗪注射液治療的UC組)。每天定時對各組實驗小鼠的一般活動情況進行觀察記錄以及給予疾病活動指數(shù)評分，造模結(jié)束后對實驗小鼠結(jié)腸組織進行組織學評分，將幾項評分綜合對UC模型進行評價。
　　2.NF-kB/COX-2該信號通路的改變與潰瘍性結(jié)腸炎疾病之間的關(guān)系
　　采用逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)氨酶鏈聚合反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase

3、Chain Reaction，RT-PCR)以及免疫組化學方法評價UC發(fā)生過程中NF-kBp65、COX-2表達的變化。
　　3.NF-kB/COX-2該通路在經(jīng)川芎嗪干預(yù)前后的UC模型中所出現(xiàn)的變化
　　采用川芎嗪治療潰瘍性結(jié)腸炎比較生理鹽水治療UC及UC模型組，觀察其治療前后NF-kBp65、COX-2在各組表達的變化，探討川芎嗪在UC的治療中所發(fā)揮的積極作用并進一步研究其在UC治療中可能存在的作用機制。
　　結(jié)果

4、：
　　1.一般情況：正常對照組小鼠在試驗期間，每天飲食飲水正常，皮毛光澤，活躍，反應(yīng)靈敏，無大便性狀改變，未見大便隱血試驗陽性。M組的部分小鼠在予5％DSS溶液代替飲用水的第2天開始出現(xiàn)大便隱血實驗陽性，無明顯大便性狀及顏色的改變。第3-4天出現(xiàn)大便變稀，大便隱血強陽性，甚至可見黑褐色血便，部分出現(xiàn)少許黏肛，飲食減少，易驚恐，喜扎堆；5-7天出現(xiàn)明顯稀血便，肉眼純稀血便，飲食減少，皮毛凌亂少光澤，精神萎靡，體重明顯下降。剖取結(jié)腸

5、觀察可見N組實驗小鼠結(jié)腸顏色粉紅并且腸壁光滑。模型組小鼠腸色深紅，腸黏膜充血水腫，甚至可見腸腔內(nèi)有大量血性分泌物。
　　2.HE染色：模型組小鼠結(jié)腸黏膜可見明顯的炎癥反應(yīng)，主要體現(xiàn)在表面上皮脫落、腺體萎縮或消失、廣泛炎性細胞侵潤等典型炎癥反應(yīng)，M組與N組兩組的組織學結(jié)果比較顯示有統(tǒng)計學意義，并且M組組織學變化符合潰瘍性結(jié)腸炎病變特征，提示：我們本次的實驗完成了對小鼠UC模型的復(fù)制。Z組小鼠經(jīng)川芎嗪治療7天后比較M組可見病變黏膜充血

6、水腫減輕，鏡下黏膜及黏膜淺層仍有部分中性粒細胞、淋巴細胞侵潤，并且Z組小鼠結(jié)腸黏膜染色后組織學計分結(jié)果低于模型組及生理鹽水組。
　　3.RT-PCR結(jié)果及免疫組化結(jié)果：與N組比較，M組NF-kBp65、COX-2的mRNA表達均顯著升高(P<0.05)，經(jīng)由川芎嗪治療后，UC的炎癥狀態(tài)較M組明顯得到改善，NF-kBp65以及COX-2的mRNA表達均顯著降低，二者在兩組中統(tǒng)計結(jié)果比較存在差別(P<0.05)。免疫組化學結(jié)果顯示，M

7、組中可見NF-kBp65、COX-2表達都有顯著增加；經(jīng)川芎嗪治療后，UC炎癥狀態(tài)得到緩解，NF-kBp65、COX-2在Z組表達顯著降低，Z組免疫組化學評分比較M組其結(jié)果存在統(tǒng)計學的差別(P<0.05)。Y組相比較M組，其炎癥狀態(tài)有所緩解，NF-kBp65、COX-2表達均有所減少，但是兩組結(jié)果比較無統(tǒng)計學差別(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　NF-k_Bp65和COX-2在UC模型小鼠的結(jié)腸黏膜中表達均有增多，提示二者