川芎嗪對(duì)實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎NF-kB-COX-2信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)主要通過檢測(cè)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎經(jīng)川芎嗪治療前后NF-kB/COX-2信號(hào)通路的變化，研究潰瘍性結(jié)腸炎經(jīng)川芎嗪治療前后疾病相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)的變化，說明川芎嗪治療作用同時(shí)探求其在潰瘍性結(jié)腸炎治療中發(fā)揮作用的途徑。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及制備UC模型
　　5％葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulfate sodium，簡稱DSS)口飼法制備小鼠UC模型。隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為：N組(正常對(duì)照組)，M組(

2、UC模型組)，Y組(生理鹽水治療的潰瘍性結(jié)腸炎治療對(duì)照組)以及Z組(給予川芎嗪注射液治療的UC組)。每天定時(shí)對(duì)各組實(shí)驗(yàn)小鼠的一般活動(dòng)情況進(jìn)行觀察記錄以及給予疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分，造模結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分，將幾項(xiàng)評(píng)分綜合對(duì)UC模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　2.NF-kB/COX-2該信號(hào)通路的改變與潰瘍性結(jié)腸炎疾病之間的關(guān)系
　　采用逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)氨酶鏈聚合反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase

3、Chain Reaction，RT-PCR)以及免疫組化學(xué)方法評(píng)價(jià)UC發(fā)生過程中NF-kBp65、COX-2表達(dá)的變化。
　　3.NF-kB/COX-2該通路在經(jīng)川芎嗪干預(yù)前后的UC模型中所出現(xiàn)的變化
　　采用川芎嗪治療潰瘍性結(jié)腸炎比較生理鹽水治療UC及UC模型組，觀察其治療前后NF-kBp65、COX-2在各組表達(dá)的變化，探討川芎嗪在UC的治療中所發(fā)揮的積極作用并進(jìn)一步研究其在UC治療中可能存在的作用機(jī)制。
　　結(jié)果

4、：
　　1.一般情況：正常對(duì)照組小鼠在試驗(yàn)期間，每天飲食飲水正常，皮毛光澤，活躍，反應(yīng)靈敏，無大便性狀改變，未見大便隱血試驗(yàn)陽性。M組的部分小鼠在予5％DSS溶液代替飲用水的第2天開始出現(xiàn)大便隱血實(shí)驗(yàn)陽性，無明顯大便性狀及顏色的改變。第3-4天出現(xiàn)大便變稀，大便隱血強(qiáng)陽性，甚至可見黑褐色血便，部分出現(xiàn)少許黏肛，飲食減少，易驚恐，喜扎堆；5-7天出現(xiàn)明顯稀血便，肉眼純稀血便，飲食減少，皮毛凌亂少光澤，精神萎靡，體重明顯下降。剖取結(jié)腸

5、觀察可見N組實(shí)驗(yàn)小鼠結(jié)腸顏色粉紅并且腸壁光滑。模型組小鼠腸色深紅，腸黏膜充血水腫，甚至可見腸腔內(nèi)有大量血性分泌物。
　　2.HE染色：模型組小鼠結(jié)腸黏膜可見明顯的炎癥反應(yīng)，主要體現(xiàn)在表面上皮脫落、腺體萎縮或消失、廣泛炎性細(xì)胞侵潤等典型炎癥反應(yīng)，M組與N組兩組的組織學(xué)結(jié)果比較顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且M組組織學(xué)變化符合潰瘍性結(jié)腸炎病變特征，提示：我們本次的實(shí)驗(yàn)完成了對(duì)小鼠UC模型的復(fù)制。Z組小鼠經(jīng)川芎嗪治療7天后比較M組可見病變黏膜充血

6、水腫減輕，鏡下黏膜及黏膜淺層仍有部分中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞侵潤，并且Z組小鼠結(jié)腸黏膜染色后組織學(xué)計(jì)分結(jié)果低于模型組及生理鹽水組。
　　3.RT-PCR結(jié)果及免疫組化結(jié)果：與N組比較，M組NF-kBp65、COX-2的mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.05)，經(jīng)由川芎嗪治療后，UC的炎癥狀態(tài)較M組明顯得到改善，NF-kBp65以及COX-2的mRNA表達(dá)均顯著降低，二者在兩組中統(tǒng)計(jì)結(jié)果比較存在差別(P<0.05)。免疫組化學(xué)結(jié)果顯示，M

7、組中可見NF-kBp65、COX-2表達(dá)都有顯著增加；經(jīng)川芎嗪治療后，UC炎癥狀態(tài)得到緩解，NF-kBp65、COX-2在Z組表達(dá)顯著降低，Z組免疫組化學(xué)評(píng)分比較M組其結(jié)果存在統(tǒng)計(jì)學(xué)的差別(P<0.05)。Y組相比較M組，其炎癥狀態(tài)有所緩解，NF-kBp65、COX-2表達(dá)均有所減少，但是兩組結(jié)果比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　NF-k_Bp65和COX-2在UC模型小鼠的結(jié)腸黏膜中表達(dá)均有增多，提示二者