锝標(biāo)記雌二醇顯像劑的制備及其在雌激素受體顯像中的應(yīng)用.pdf

1、目的：雌激素受體（estrogen receptors, ERs）在乳腺癌中廣泛表達(dá)。非侵入性ER顯像對(duì)于臨床乳腺癌治療方案制定有著重要意義。本研究旨在制備一種新型ER特異性99mTc標(biāo)記探針，并評(píng)估其在體外及體內(nèi)的靶向雌激素受體的能力。
　　方法：（1）制備锝標(biāo)雌二醇前體（DTPA-EDL）：以雌酮為原材料反應(yīng)生成3-氨乙基雌二醇(EDL)，加入二乙三胺五乙酸雙酸酐（DTPAA）反應(yīng)后透析純化得到DTPA-EDL作為標(biāo)記前體。（

2、2）99mTc-DTPA-EDL標(biāo)記率、放化純其穩(wěn)定性：取99mTc淋洗液加入少量SnCl2標(biāo)記DTPA-EDL，采用薄層色譜層析技術(shù)測(cè)量99mTc-DTPA-EDL標(biāo)記率，使用C18反向柱進(jìn)行純化，并測(cè)定1、2、4及24h其在組氨酸、半胱氨酸、PBS及血清中的穩(wěn)定性。（3）ER表達(dá)細(xì)胞鑒定：培養(yǎng)ER表達(dá)不同的兩種乳腺癌細(xì)胞MCF-7及MDA-MB-231，使用Western Blot和免疫熒光染色進(jìn)行檢測(cè)細(xì)胞中雌激素受體的表達(dá)。（4）

3、99mTc-DTPA-EDL體外實(shí)驗(yàn)：在不同濃度下測(cè)定99mTc-DTPA-EDL與MCF-7細(xì)胞攝取，測(cè)定細(xì)胞飽和實(shí)驗(yàn)及特異性攝取實(shí)驗(yàn)相關(guān)結(jié)果，同時(shí)比較在 MCF-7及MDA-MB-231兩種ER表達(dá)不同的細(xì)胞中99mTc-DTPA-EDL的阻斷及流出實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞結(jié)合率變化。（5）99mTc-DTPA-EDL在正常小鼠及腫瘤模型裸鼠中的生物分布及SPECT顯像：建立MCF-7及MDA-MB-231荷瘤鼠模型，在模型鼠及正常BALB/

4、c小鼠注入標(biāo)記藥物后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定其腫瘤組織及正常組織，包括血液、腦、心臟、肺、肝、脾、胃、小腸、大腸、卵巢、肌肉及骨骼中％ID/g，設(shè)置預(yù)注射未標(biāo)記的DTPA-EDL的MCF-7荷瘤鼠為阻斷組，觀察注射99mTc-DTPA-EDL后MCF-7荷瘤鼠、MFA-MB-231荷瘤鼠及阻斷組SPECT顯像情況。
　　結(jié)果：（1）3-氨乙基雌二醇及 DTPA-EDL產(chǎn)率分別為68%及34%，上述結(jié)果均使用1H-NMR確認(rèn)結(jié)構(gòu)。（2）99m

5、Tc-DTPA-EDL的放射性標(biāo)記率為64.5±2.8%（n=5），放化純?yōu)?8.3±1.3%（n=5），不同條件下24小時(shí)放化純?nèi)源笥?0%，提示標(biāo)記物穩(wěn)定。（3）Western Blot及免疫熒光染色顯示，MCF-7細(xì)胞呈ER高表達(dá)，而MDA-MB-231細(xì)胞ER表達(dá)較低。（4）99mTc-DTPA-EDL體外實(shí)驗(yàn)顯示與MCF-7細(xì)胞較高的親和力（Kd=15.1±2.1 nm），特異性攝取率占總細(xì)胞攝取45％以上。流出實(shí)驗(yàn)表明99m

6、Tc-DTPA-EDL在MCF-7細(xì)胞內(nèi)保留時(shí)間較長(zhǎng)，穩(wěn)定性高。阻斷實(shí)驗(yàn)，攝取率明顯降低證實(shí)99mTc-DTPA-EDL在MCF-7細(xì)胞中特異性與ER結(jié)合。（5）正常小鼠體內(nèi)生物分布顯示99mTc-DTPA-EDL主要經(jīng)肝、腎代謝，血液中清除較快，4h時(shí)肝、腎及血液中放射性分別為48.52±3.35% ID/g、10.07±0.91% ID/g及2.08±0.22% ID/g（n=5）。SPECT顯像顯示99mTc-DTPA-EDL在注

7、射后1h腫瘤組織出現(xiàn)顯影，4h顯像最清晰，而在 MDA-MB-231荷瘤組及阻斷組內(nèi)未見(jiàn)明顯腫瘤攝取。上述數(shù)據(jù)表明，99mTc-DTPA-EDL能特異性靶向結(jié)合ER陽(yáng)性腫瘤。
　　結(jié)論：在制備99mTc-DTPA-EDL時(shí)，其標(biāo)記前體制備過(guò)程簡(jiǎn)單，產(chǎn)率穩(wěn)定；標(biāo)記過(guò)程條件溫和，簡(jiǎn)單易行；標(biāo)記產(chǎn)物標(biāo)記率及放化純較高、穩(wěn)定性較好。99mTc-DTPA-EDL的體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均顯示其具備特性結(jié)合ER的能力，使其成為有前途的雌激素受體SPE

8、CT顯像劑。
　　目的：制備锝標(biāo)記雌二醇顯像劑99mTc-GAP-EDL，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和在體腫瘤動(dòng)物模型顯像評(píng)價(jià)其與雌激素受體結(jié)合的特性，為乳腺癌雌激素受體表達(dá)的無(wú)創(chuàng)評(píng)價(jià)提供SPECT顯像分子探針。
　　方法：以雌酮為原材料分兩步反應(yīng)生成3-氨乙基雌二醇(EDL)，與多聚谷氨酸(GAP)反應(yīng)得到 GAP-EDL，锝標(biāo)記法得到99mTc-GAP-EDL，測(cè)定其標(biāo)記率及穩(wěn)定性。培養(yǎng)雌激素受體高表達(dá)及低表達(dá)乳腺癌細(xì)胞MCF-7

9、及MDA-MB-231，不同時(shí)間下測(cè)定兩種細(xì)胞與99mTc-GAP-EDL細(xì)胞攝取動(dòng)力學(xué)改變；大量未標(biāo)記GAP-EDL及雌二醇預(yù)處理進(jìn)行細(xì)胞阻斷實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞結(jié)合率變化。正常BALB/c小鼠生物分布在注入標(biāo)記藥物后0.5-4h進(jìn)行，測(cè)定其在血液及主要組織器官中攝取值。建立 MCF-7及MDA-MB-231荷瘤鼠模型，設(shè)置阻斷組，觀察注射99mTc-GAP-EDL后1、2及4h后三組荷瘤鼠SPECT顯像。
　　結(jié)果：99mTc-GA

10、P-EDL標(biāo)記率98.8%，24小時(shí)穩(wěn)定性仍大于90%。99mTc-GAP-EDL細(xì)胞攝取率與細(xì)胞 ER表達(dá)相關(guān)，4h時(shí) MCF-7及 MDA-MB-231細(xì)胞攝取率分別為4.84±0.21%與2.11±0.27%（n=3, P<0.05）。GAP-EDL及雌二醇阻斷組99mTc-GAP-EDL攝取率較未阻斷組分別下降了49.2%與54.9%。正常小鼠體內(nèi)生物分布顯示99mTc-GAP-EDL主要經(jīng)肝、腎代謝，血液中清除較快，4h時(shí)肝、

11、腎及血液中放射性分別為(8.13±2.34)%ID/g、(4.93±1.14)%ID/g及(0.82±0.36)%ID/g。99mTc-GAP-EDL在MCF-7荷瘤裸鼠顯像腫瘤1h出現(xiàn)顯影，4h顯像最清晰，而阻斷組 MCF-7裸鼠及MDA-MB-231荷瘤鼠腫瘤部位未見(jiàn)明顯顯影。
　　結(jié)論：99mTc-GAP-EDL制備過(guò)程簡(jiǎn)單，標(biāo)記條件溫和，產(chǎn)物標(biāo)記率高、穩(wěn)定性較好。體外及在體顯像顯示其與雌激素受體有較好的結(jié)合特性，表明99m