南蛇藤乙酸乙酯提取物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞細(xì)胞毒作用及誘導(dǎo)其凋亡實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。Caspases家族、Bcl-2家族、p53等多種因子都參與激活或調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，其中Caspase-3廣泛分布于各種不同類型的細(xì)胞中，是Caspase家族中最重要的凋亡執(zhí)行者之一，激活的Caspase-3能使許多與細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞周期及DNA修復(fù)等相關(guān)蛋白或激酶失活，從而誘發(fā)細(xì)胞凋亡。從細(xì)胞凋亡這一新視角來(lái)揭示中藥抗腫瘤的作用機(jī)制，篩選抗癌中藥具有十分重要的意義。
　　

2、 南蛇藤(CelastrusorbiculatusThunb.)為衛(wèi)矛科南蛇藤(celastrus)屬植物，分布廣泛，其藤莖、根、葉、果均可入藥?，F(xiàn)代藥物化學(xué)研究證實(shí)，其具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗生育等廣泛的藥理活性。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)南蛇藤抗癌活性及機(jī)理研究有一定的報(bào)道。但對(duì)南蛇藤誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其途徑的系統(tǒng)研究并不充分。本課題將以南蛇藤乙酸乙酯提取物為研究對(duì)象，觀察其體外對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，并從細(xì)胞凋亡角度研究南蛇

3、藤抗腫瘤細(xì)胞作用，為南蛇藤應(yīng)用于開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的:
　　 研究南蛇藤乙酸乙酯提取物體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，初步探討其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的途徑，為南蛇藤的進(jìn)一步研究開拓思路。方法：
　　 (1)采用cck-8法檢測(cè)不同濃度南蛇藤乙酸乙酯提取物對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖的影響。
　　 (2)采用AnnexinV-FITC與碘化丙啶(promideiodine，PI)雙染色法通過(guò)

4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)南蛇藤乙酸乙酯提取物干預(yù)肝癌HepG2細(xì)胞24小時(shí)后的凋亡數(shù)。
　　 (3)應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)南蛇藤乙酸乙酯提取物干預(yù)24小時(shí)后，對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞周期的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)5個(gè)濃度的南蛇藤乙酸乙酯提取物（30、60、120、240、300ug/ml）對(duì)HepG2細(xì)胞均有一定的抑制作用，且呈劑量依賴性。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著（P＜0.05）。
　　 (2)細(xì)胞早期凋亡（An

5、nexinV-PI檢測(cè)數(shù)據(jù)）表明隨著南蛇藤提取物濃度（15-120μg/ml）的提高，凋亡細(xì)胞的數(shù)量在一定程度上有量效作用。
　　 (3)藥物干預(yù)HepG2細(xì)胞24h后，細(xì)胞周期停滯在G0-G1期，其中240μg/ml最為顯著（P=0.01）；同時(shí)HepG2細(xì)胞產(chǎn)生了亞二倍峰，說(shuō)明發(fā)生了細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 南蛇藤乙酸乙酯提取物具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤作用，凋亡是其殺傷腫瘤細(xì)胞的途徑之一；抗腫瘤的機(jī)理是通過(guò)