緩釋CGRP的殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥體外對(duì)HUVECs增殖的影響.pdf

1、目的:研究緩釋降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥（CGRP/Chitosan-Sr-CPC）的合成方法、形態(tài)結(jié)構(gòu)、力學(xué)性能、釋放規(guī)律，及其對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖的影響。
　　方法:(1)材料分組與制備:實(shí)驗(yàn)分3組，CGRP/Chitosan-Sr-CPC為實(shí)驗(yàn)組，摻鍶磷酸鈣骨水泥(Sr-CPC)（鍶和鈣的摩爾比是1∶9）、殼聚糖涂層摻鍶磷酸鈣骨水泥(Chitosan-Sr-CPC)為對(duì)照組

2、。根據(jù)文獻(xiàn)方法制備Sr-CPC[1-2]，Sr-CPC作為多孔基體，采用加壓滲透和冷凍干燥法，吸附CGRP進(jìn)入孔隙內(nèi)，然后再采用加壓滲透和冷凍干燥法，表面吸附殼聚糖(Chitosan)涂層，合成CGRP/Chitosan-Sr-CPC和Chitosan-Sr-CPC（未吸附CGRP）。(2)材料表征:掃描電鏡(SEM)、微計(jì)算機(jī)斷層掃描（micro-CT）、電子動(dòng)靜態(tài)萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)觀察分析材料的表面結(jié)構(gòu)、孔隙和力學(xué)性能，ELISA試劑盒

3、檢測(cè)探究模擬體液(SBF)中材料CGRP的釋放規(guī)律。(3)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):免疫熒光法(IF)檢測(cè)觀察原代人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)表面CGRP受體表達(dá)的情況，骨架染色觀察材料表面的細(xì)胞粘附形態(tài)，CCK8法評(píng)估材料細(xì)胞毒性和刺激增殖能力， ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞分泌內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)的水平。
　　結(jié)果:成功合成CGRP/Chitosan-Sr-CPC。材料表征:SEM鏡下觀察其表面均勻鋪展一層Chitosan涂層，在

4、SBF中第7天仍然存在。其中Sr-CPC基體在SBF中表面逐漸生成花叢樣、針尖樣物質(zhì)（根據(jù)以往實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)資料，該物質(zhì)為羥基磷灰石晶體）[1-2]。micro-CT檢測(cè)孔隙率為(4.06±1.19)％，孔徑多分布于45-82μm區(qū)間。與Sr-CPC相比，早期無(wú)明顯抗壓強(qiáng)度損失，且隨時(shí)間逐步增加。ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示CGRP可持續(xù)釋放至第5天，釋放速率隨時(shí)間逐漸減慢。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):IF鏡下觀察HUVECs表達(dá)CGRP受體。從骨架染色圖片

5、可看出細(xì)胞在材料表面良好粘附。CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，各組材料溶出物無(wú)細(xì)胞毒性，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。ELISA試劑盒檢測(cè)第2天培養(yǎng)液中細(xì)胞分泌VEGF水平，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)方法合成的CGRP/Chitosan-Sr-CPC復(fù)合骨水泥，生物相容性良好，結(jié)構(gòu)性能與Sr-CPC相比無(wú)明顯差異，同時(shí)體外早期可以持續(xù)釋放微量活性CGRP神經(jīng)肽，與細(xì)胞CGRP受體特異性