高氟暴露對(duì)人群血清BSP表達(dá)水平影響的研究.pdf

1、氟是人體必需的微量元素之一，在生理代謝過程中發(fā)揮著不可替代的作用。由于地殼中氟的分布不均衡，一些環(huán)境中的氟元素水平過高，可造成人體長期從外界獲得的氟超過正常生理需要量及體液和組織中氟離子濃度增高，從而導(dǎo)致全身慢性中毒性病變，這種慢性氟中毒稱為地方性氟中毒（簡(jiǎn)稱地氟?。?。地方性氟中毒病區(qū)涉及人口眾多，幾乎遍及五大洲的50多個(gè)國家和地區(qū)。在發(fā)達(dá)國家地方性氟中毒危害較輕或接近消除，而在亞洲、非洲的一些發(fā)展中國家則流行較重。目前，我國地氟病病區(qū)

2、人口約為1.18億，除上海市和海南省外，其他各省、區(qū)均有病區(qū)分布。重癥地氟病病人可部分或全部喪失勞動(dòng)能力，甚至癱瘓。地方性氟中毒的病理表現(xiàn)主要分為骨相損害和非骨相損害，其中以骨相損害為重，可導(dǎo)致骨轉(zhuǎn)換加速、骨硬化、骨軟化、骨質(zhì)疏松、骨周軟組織骨化以及軟骨和關(guān)節(jié)的退行性改變。在臨床上，地氟病主要表現(xiàn)為氟骨癥和氟斑牙。氟骨癥是慢性氟中毒最主要也是最嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)，高骨轉(zhuǎn)換狀態(tài)即骨轉(zhuǎn)換加速是其重要的病理特征，表現(xiàn)為骨吸收與骨形成正常動(dòng)態(tài)平衡的

3、破壞。
　　 骨涎蛋白（bone siatoprotein，BSP）是一種高度硫酸化、磷酸化的酸性糖蛋白，是骨或其他礦化組織中一種主要的非膠原基質(zhì)蛋白，與骨橋蛋白（osteopontin，OPN）同為小整合素結(jié)合配體N端聯(lián)結(jié)糖蛋白（small integrin-binding ligand，N-linked glyeoprotein，SIBLING）家族成員。BSP作為一種配體蛋白通過C末端RGD肽段識(shí)別整合素αvβ3使破骨細(xì)胞

4、內(nèi)鈣離子濃度短暫升高，從而加速骨分解過程。BSP主要與羥磷灰石核心形成及骨再建過程有關(guān)，在新骨形成及骨再建活躍部位呈現(xiàn)高表達(dá)，在成骨細(xì)胞的趨化、粘附和分化以及基質(zhì)的礦化過程中發(fā)揮重要作用。在某些骨代謝性疾?。ㄈ缍喟l(fā)性骨髓瘤（MM）、無癥狀或良性甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)癥（PHPT）、Paget ?。┖凸寝D(zhuǎn)移瘤病人的血清中BSP水平可明顯升高。目前，血清BSP濃度已被作為一個(gè)重要的反映機(jī)體骨轉(zhuǎn)換水平的骨代謝指標(biāo)。在國外，具有血清免疫活性的BSP水

5、平已被作為一個(gè)新的骨吸收代謝指標(biāo)應(yīng)用于臨床研究。
　　 鑒于地方性氟中毒對(duì)人體的危害以骨相損害為重，而骨涎蛋白在骨代謝過程中發(fā)揮著重要作用，因此，了解長期高氟暴露是否可影響機(jī)體BSP的表達(dá)水平將有助于闡明慢性氟中毒的發(fā)病機(jī)制，然而，迄今相關(guān)研究報(bào)告極少，僅見徐志靈等報(bào)告了過量氟對(duì)大鼠切牙骨涎蛋白表達(dá)的影響和本教研室2005級(jí)研究生韓冰關(guān)于亞慢性氟暴露對(duì)大鼠骨組織BSP表達(dá)水平影響的研究報(bào)告，尚未見到有關(guān)人群研究的結(jié)果。本研究旨在

6、探討長期高氟暴露是否會(huì)影響人群血清BSP的表達(dá)水平，從而為氟骨癥的發(fā)病機(jī)制探討和有效防治提供來自人群研究的基礎(chǔ)信息。
　　 對(duì)象與方法：
　　 一、研究對(duì)象的選擇與分組
　　 根據(jù)遼寧省疾病預(yù)防控制中心提供的遼寧省飲水型地方性氟中毒病區(qū)分布的相關(guān)信息，選取具有不同地理特征和不同歷史水氟含量的4個(gè)自然村，即阜新市彰武縣豐田村、錦州市凌海市（縣級(jí)市）建業(yè)村、沈陽市康平縣望山堡村和沈陽市法庫縣黃荒地村作為調(diào)查點(diǎn)，開展入

7、戶普查，調(diào)查對(duì)象為年滿17周歲的當(dāng)?shù)爻Ｗ∪丝冢灿?jì)461人。調(diào)查內(nèi)容包括：基本人口學(xué)信息、經(jīng)濟(jì)收入情況、文化程度、流行病學(xué)資料和歷史上高水氟暴露情況等，并采集血樣與尿樣。根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，將尿氟值>1.6 mg/L的全部54名調(diào)查對(duì)象作為高氟暴露組（簡(jiǎn)稱高氟組），并從尿氟值≤1.6 mg/L的調(diào)查對(duì)象中隨機(jī)抽取29人作為對(duì)照組。
　　 二、樣品采集與檢測(cè)
　　 （一）尿樣采集與尿氟含量測(cè)定
　　 采

8、集研究對(duì)象隨時(shí)一次性尿樣10 mL，記錄姓名、編號(hào)，保存于-20℃冰箱中待測(cè)。采用氟離子選擇電極法測(cè)定尿氟含量。
　　 （二）血樣采集與血清BSP含量測(cè)定
　　 用抗凝真空采血管采集研究對(duì)象清晨空腹血樣5 mL，做好記錄，室溫靜置2小時(shí)后以3000 rpm離心20分鐘，分離血清，分裝保存于-70℃冰箱中待測(cè)。人血清BSP含量的測(cè)定采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。BSP ELISA試劑盒購自德國Immundiagnos

9、tik公司。測(cè)定方法：用抗人BSP抗體包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和人血清樣品中的BSP與抗體結(jié)合后，加入過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗人BSP，形成免疫復(fù)合物連接在酶標(biāo)板上，加入底物工作液四甲基聯(lián)苯胺TMB顯藍(lán)色，最后加入酸性終止液。采用KHB ST-360全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀于450 nm處測(cè)定OD值，并以620nm處的OD值作為參考值。人血清BSP濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣本中的BSP濃度。
　　 三、統(tǒng)計(jì)分析
　　

10、 利用Excel軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入整理，采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。采用CurveExpert軟件對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行曲線擬合。
　　 結(jié)果：
　　 1、高氟組與對(duì)照組尿氟分布特征
　　 高氟組和對(duì)照組的樣本含量、尿氟濃度（mg/L）的范圍、中位數(shù)和四分位數(shù)間距分別為54，1.78～11.18，3.19和1.29；29，0.12～1.42，

11、0.60和0.22。
　　 2、高氟組與對(duì)照組人口學(xué)特征比較
　　 高氟組與對(duì)照組在性別構(gòu)成上的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高氟組和對(duì)照組的年齡分布范圍分別為17～65歲和26～79歲，高氟組的平均年齡高于對(duì)照組；高氟組的經(jīng)濟(jì)收入水平和文化程度均低于對(duì)照組。
　　 3、兩組人群血清BSP水平的比較
　　 高氟組與對(duì)照組人群血清BSP含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4、按性別分層比較兩組人群的血清BSP水平

12、r>　　 分別比較男性和女性兩組人群的血清BSP含量，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、兩組不同性別人群血清BSP水平的比較
　　 分別比較高氟組和對(duì)照組不同性別人群的血清BSP含量，其差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6、兩組尿氟含量與血清BSP含量關(guān)系的研究
　　 高氟組和對(duì)照組尿氟含量與血清BSP含量之間均無直線相關(guān)關(guān)系。
　　 7、兩組人群血清BSP含量與年齡關(guān)系的研究
　　 高氟組人

13、群血清BSP含量與年齡之間有正的直線相關(guān)關(guān)系；而對(duì)照組人群血清BSP含量與年齡之間則不存在直線相關(guān)關(guān)系。
　　 8、兩組不同性別人群血清BSP含量與年齡關(guān)系的研究
　　 高氟組男性血清BSP含量與年齡之間有正的直線相關(guān)關(guān)系，而女性血清BSP含量與年齡之間無直線相關(guān)關(guān)系；對(duì)照組男性和女性的血清BSP含量與年齡之間均無直線相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 在本研究條件下，未發(fā)現(xiàn)高氟暴露對(duì)人群血清BSP的表達(dá)水平