MiR-223靶向IGF2和ZEB1調(diào)控家禽成肌細(xì)胞的增殖和分化.pdf

1、MicroRNA是一種內(nèi)源性小分子非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中并參與調(diào)控各類細(xì)胞進(jìn)程。大量研究表明，miRNA參與了雞胚生長(zhǎng)發(fā)育、神經(jīng)細(xì)胞和肌肉細(xì)胞的增殖和分化、細(xì)胞遷移、性成熟和免疫應(yīng)答等一系列生命活動(dòng)，對(duì)肉雞的生長(zhǎng)、發(fā)育和代謝具有重要的調(diào)控作用。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期成果的基礎(chǔ)上，篩選出miR-223作為研究肉雞生長(zhǎng)性能的候選基因，并以miR-223為切入點(diǎn)，一方面探索miR-223在骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育中的生物學(xué)功能，另一方面研究mi

2、R-223及其靶基因作用于骨骼肌細(xì)胞增殖和分化的分子機(jī)理。論文主要結(jié)果如下：
　　1．通過qRT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR-223在雞胚肌肉發(fā)育過程中呈先上升后下降的趨勢(shì)，其中，在肌肉快速發(fā)育的12E-17E高表達(dá)，說明miR-223參與雞胚的肌肉發(fā)育。
　　2．通過成肌細(xì)胞的體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) miR-223在成肌細(xì)胞分化過程中持續(xù)極顯著上升，說明miR-223可能對(duì)成肌細(xì)胞的分化具有重要調(diào)控功能。
　　3．通過流式細(xì)

3、胞術(shù)、CCK-8和qRT-PCR檢測(cè)過表達(dá)和干擾miR-223的成肌細(xì)胞，結(jié)果表明：miR-223在成肌細(xì)胞中具有抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞分化的功能。
　　4．利用生物信息學(xué)分析和參考文獻(xiàn)報(bào)道，預(yù)測(cè)與細(xì)胞增殖分化相關(guān)的IGF2基因和 ZEB1基因?yàn)?miR-223的靶基因，并通過雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、qRT-PCR和western blot等試驗(yàn)，確定miR-223能夠靶向抑制IGF2和ZEB1基因的表達(dá)。
　　5．過表達(dá)和