雜交小麥種子純度鑒定技術(shù)的研究與利用.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一，雜種優(yōu)勢(shì)是提高小麥產(chǎn)量的重要途徑。然而，由于雜交種制種過程中往往會(huì)出現(xiàn)機(jī)械混雜、生物學(xué)混雜、因隔離不夠混雜等，導(dǎo)致雜交小麥種子的純度和真實(shí)性受到一定程度的影響，給推廣應(yīng)用小麥雜交種帶來帶來一定阻力，同時(shí)也限制了小麥雜種優(yōu)勢(shì)增產(chǎn)潛力的充分發(fā)揮。本研究采用醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝膠電泳和RAPD技術(shù)對(duì)小麥雜交品種(組合)‘西雜一號(hào)’、‘西雜三號(hào)’和‘西雜五號(hào)，及其親本進(jìn)行種子鑒定分析，旨在建立一套適合雜交小

2、麥純度鑒定的簡(jiǎn)單有效方法，為雜交小麥大面積應(yīng)用于生產(chǎn)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。研究后得出如下重要結(jié)果： 1.采用種子醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)建立了‘西雜一號(hào)’、‘西雜三號(hào)，和‘一西雜五號(hào)’的標(biāo)準(zhǔn)圖譜庫(kù)。各雜交組合親本的醇溶蛋白圖譜均存在明顯差異。西雜一號(hào)和西雜三號(hào)表現(xiàn)出雙親互補(bǔ)帶型，西雜五號(hào)有一條特征譜帶，根據(jù)這些譜帶可區(qū)分專一雜交種和對(duì)應(yīng)親本。人為混種實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本研究得到的醇溶蛋白標(biāo)準(zhǔn)圖譜可以用于鑒定雜交小麥種子的純度。

3、 2.簡(jiǎn)化了干種子DNA提取方法，直接從小麥種子帶胚部分提取DNA，操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，且質(zhì)量符合RAPD分析的要求，適合用于種子純度鑒定。 3.通過反應(yīng)體系的優(yōu)化，建立了適合用于雜交小麥種子純度鑒定的RAPD反應(yīng)體系(20μL)：1×Buffer，Mg<'2+>濃度2.0 mmol/L，引物濃度400 nmol/L，raq酶0.75 U，模板濃度為30 ng，dNTPs濃度200μmol/L。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 m

4、in；94℃變性1 min，37℃退火1 min，72℃延伸2 min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min，4℃保存。 4.采用優(yōu)化的反應(yīng)體系，從120條隨機(jī)引物中篩選出23條多態(tài)性引物?！麟s一號(hào)’中篩選出互補(bǔ)性引物S164，反復(fù)驗(yàn)證表明，該引物擴(kuò)增結(jié)果清晰穩(wěn)定，可用于種子純度鑒定；‘西雜三號(hào)’中篩選到偏母型引物S158，偏父型引物S170，分別可用于區(qū)分專一雜交種和對(duì)應(yīng)父本或母本；在‘西雜五號(hào)’組合中篩選到偏母型引物OPD-0