IL-27對(duì)CIITA和MHC Ⅱ類分子的調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、白介素27(IL-27)是一個(gè)IL-12相關(guān)的多功能的細(xì)胞因子，它在免疫和炎癥發(fā)生的過程中表現(xiàn)出似乎相互矛盾的作用。IL-27包含p28和EBl3兩個(gè)亞基，作用于WSX-1亞基(也叫作TCCR)和gp130亞基構(gòu)成的異二聚體受體(IL-27R)傳遞信號(hào)。很多類型細(xì)胞如T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、肥大細(xì)胞和中性粒細(xì)胞都表達(dá)IL-27R。IL-27R與配體的結(jié)合誘導(dǎo)了胞內(nèi)的信號(hào)途徑，包括Janus kinases(JAK)和ST

2、AT轉(zhuǎn)錄因子。 本研究主要集中在探討IL-27促炎的機(jī)制。首先我們觀察了IL-27對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的免疫調(diào)控作用。IL-27刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)可快速誘導(dǎo)干擾素調(diào)節(jié)因子1(IFN regulatory factor-1，IRF-1)的表達(dá)，并顯著升高CIITA亞型IV的表達(dá)。與CIITAIV的表達(dá)相一致，MHC II基因的表答也升高。IL-27也能增強(qiáng)MHC I類分子的表達(dá)。另外，在IL-27的作用下，β2-m和TAP

3、-1 mRNA的表達(dá)水平也升高?；蛐酒治霰砻鱅L-27可以顯著上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞很多和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的基因，包括趨化因子CXCL9、CXCL10、CX3CL1的表達(dá)。這些結(jié)果首次表明IL-27能在內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào)MHC II類和I類分子的表達(dá)，提示IL-27對(duì)血管內(nèi)皮的免疫功能有重要的調(diào)控作用。我們進(jìn)一步觀察IL-27對(duì)THP-1單核細(xì)胞系的作用。THP-1細(xì)胞是研究單核細(xì)胞的很好的模型。與在內(nèi)皮細(xì)胞相似，IL-27可上調(diào)THP-1細(xì)胞CIIT

4、A III和CIITA IV的mRNA表達(dá)水平，導(dǎo)致細(xì)胞表面MHC II類分子的表達(dá)增加，以及HLA-DM和DO的表達(dá)水平升高。另外，IL-27可上調(diào)beta-2m、TAP-1和MHCI類分子的表達(dá)。進(jìn)一步的研究表明，IL-27可增強(qiáng)THP-1細(xì)胞表面共刺激分子CD80和CD86及粘附分子CD54的表達(dá)。這些結(jié)果表明IL-27可促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的抗原提呈功能。為了進(jìn)一步分析IL-27通過何種信號(hào)機(jī)制參與調(diào)節(jié)CIITA和MHC II的表達(dá)

5、，我們用ERK抑制劑U0126、p38MAPK抑制劑SB203580和P13K抑制劑LX294002來(lái)觀察各條信號(hào)通路在IL-27誘導(dǎo)CIITA和MHC II表達(dá)中的作用。我們的結(jié)果表明p38MAPK和P13K信號(hào)通路都為IL-27作用下最優(yōu)化的MHC II的表達(dá)所必需，而ERK信號(hào)通路對(duì)IL-27誘導(dǎo)的MHC II表達(dá)有抑制作用。另外，P13K信號(hào)通路也為IL-27誘導(dǎo)最優(yōu)化的MHC I表達(dá)所必需。這些結(jié)果表明P13K信號(hào)通路參與正調(diào)

6、控IL-27介導(dǎo)的效應(yīng)，而ERK信號(hào)通路對(duì)IL-27誘導(dǎo)的MHC II類分子的表達(dá)有抑制作用。進(jìn)一步的研究表明，TLR2激動(dòng)劑Pam3CSK4和TLR4激動(dòng)劑LPS介導(dǎo)的TLR信號(hào)能部分阻斷IL-27誘導(dǎo)得THP-1細(xì)胞MHC II的表達(dá)。LPS的抑制效應(yīng)部分通過ERK和p38MAPK信號(hào)途徑介導(dǎo)。 研究表明，IL-27對(duì)很多實(shí)體瘤有很強(qiáng)的抗腫瘤效應(yīng)。IL-27的抗腫瘤機(jī)制主要包括誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活

7、化。IL-27還能通過誘導(dǎo)IP-10和MIG的表達(dá)而抑制腫瘤的血管新生。我們的另外一項(xiàng)研究是構(gòu)建IL-27的表達(dá)載體而評(píng)估其對(duì)小鼠白血病模型的抗腫瘤效應(yīng)。我們用重疊延伸PCR來(lái)擴(kuò)增信號(hào)肽和單鏈IL-27融合基因，然后把這些基因插入許多真核表達(dá)載體中，包括pIRES2-EGFP、pcDNA3.1(-)、p3XFLAG-CMV-9和PCAGEN。用免疫沉淀和western blot檢測(cè)IL-27表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞上清中IL-27的分

8、泌和表達(dá)。我們用液壓基因轉(zhuǎn)移法(hydrodynamic gene transfer，HGT)將IL-27表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠體內(nèi)后，在小鼠血清中也能檢測(cè)到IL-27的表達(dá)。我們用能否誘導(dǎo)HUVECsCIITA mRNA的表達(dá)來(lái)鑒定IL-27的生物學(xué)活性?？傊覀兊难芯渴状伪砻鱅L-27能夠誘導(dǎo)單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞CIITA和MHC II的表達(dá)。IL-27還能上調(diào)MHC I類分子、共刺激分子和粘附分子的表達(dá)。另外，IL-27能激活一個(gè)重要的