羅氏沼蝦IMD信號通路關(guān)鍵基因(Relish、IMD)的克隆和功能研究.pdf

1、免疫缺陷同系物(IMD)信號通路在無脊椎動物先天免疫中發(fā)揮重要的作用。IMD和Relish是IMD信號通路中2個關(guān)鍵的組分。本課題以羅氏沼蝦為研究對象，從羅氏沼蝦克隆到一個Relish(MrRelish)和一個IMD(MrIMD)基因，并對他們在先天免疫中的功能進(jìn)行了初步研究。MrRelish的cDNA全長為5072 bp，包含一個3510 bp的開放閱讀框，編碼1169個氨基酸。MrIMD的cDNA全長為744bp，其開放閱讀框為55

2、1bp，編碼184個氨基酸。構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹表明，MrRelish和其他來源于甲殼類動物的Relish蛋白屬于同一個分支。在mRNA水平上，MrRelish廣泛分布于羅氏沼蝦的多種組織，包括血細(xì)胞、心臟、肝胰腺、鰓、胃和腸道中，并在血細(xì)胞和腸道中具有相對較高的表達(dá)水平。MrIMD轉(zhuǎn)錄本也廣泛分布于心臟、肝胰腺、鰓、胃和腸道中，Mr IMD在鰓組織中表達(dá)量最高。MrRelish在鰓組織中，受鰻弧菌刺激6小時后，表達(dá)上調(diào)。受白斑綜合癥病毒(

3、WSSV)病毒刺激后，MrIMD在鰓中的表達(dá)水平隨著感染時間的延長而逐漸升高，并在病毒刺激48小時后達(dá)到最高值;而在肝胰腺中，MrIMD受WSSV刺激24小時后達(dá)到最高。MrIMD在肝胰腺中，受嗜水氣單胞菌刺激6小后達(dá)到最高。在果蠅S2細(xì)胞中，分別過表達(dá)MrRelish和MrIMD后，抗菌肽Metchnikowin(Mtk),Attacin(Atta),Drosomycin(Drs),Cecropin(CecA)和Penaeidin(P