地耳草的品質(zhì)評價研究.pdf

1、本文以地耳草為研究對象，對地耳草的有效成分及有害物質(zhì)進行了含量分析，對地耳草的指紋圖譜進行了研究，并對不同生長期地耳草有效物質(zhì)的動態(tài)積累和變化規(guī)律進行了研究，為地耳草藥材的質(zhì)量評價及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂提供了可靠依據(jù)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　 1．地耳草商品藥材的鑒定研究。用傳統(tǒng)鑒定方法及現(xiàn)代鑒定技術(shù)，從藥材性狀、顯微特征、薄層色譜及HPLC指紋圖譜等方面，建立地耳草及其易混品細(xì)葉金絲桃的鑒定方法；以有效成分定量分析結(jié)合指紋圖譜

2、整體分析的模式，評價商品地耳草的品質(zhì)。
　　 2．UV-VIS法測定地耳草總黃酮的含量。選取槲皮素作對照品，以測定的槲皮素含量來作為地耳草中總黃酮含量的計算指標(biāo)，測定值與真實值有一定差異，本實驗旨在對不同產(chǎn)地地耳草中總黃酮的含量作量化比較，評價藥材質(zhì)量。
　　 3．HPLC法測定六種黃酮類單體的含量。供試品制備用80％甲醇50mL，根據(jù)本實驗供試品制備的優(yōu)化結(jié)果，認(rèn)為回流提取90min×3所得6種黃酮的總量最高。選取地耳

3、草已知明確的六種黃酮類單體（蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山柰酚）作對照品，采用HPLC法同時測定六種黃酮類單體的含量。此測定方法，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重現(xiàn)性良好，為地耳草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評價研究提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 4．建立高效毛細(xì)管電泳二極管陣列檢測法(HPCE-DAD)同時測定地耳草中蘆丁、異槲皮苷、金絲桃苷、金絲桃苷、槲皮苷、山奈酚及槲皮素含量的方法。選擇毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離模式，以40mmol·L-1硼砂緩沖液(p

4、H8.62)為電泳介質(zhì)，未涂漬標(biāo)準(zhǔn)熔融石英毛細(xì)管(75μmi．d．×64.5cm，有效長度56cm)為分離通道，，分離電壓為25kV，檢測波長為206nm，毛細(xì)管溫度為25℃，壓力進樣為50mbar，8s。6種黃酮的峰面積與濃度的線性關(guān)系良好(r＞0.9953)；加樣回收率為98.8～102.9％。該方法簡單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性較好，可用于地耳草藥材質(zhì)量的評價和控制。
　　 5．電感耦合等離子發(fā)射光譜法(ICP)和微波消解-原子熒光光

5、譜法測定21種無機元素的含量（16種微量元素和5種重金屬元素）。并用SPSS16.0對數(shù)據(jù)進行分析處理，獲得了地耳草無機元素含量的準(zhǔn)確信息，可為地耳草微量元素的藥效藥理研究提供科學(xué)依據(jù)，同時還將不同產(chǎn)地的微量元素制成元素分布圖譜，可以進行地耳草的真?zhèn)舞b別。
　　 6．建立了地耳草高效液相色譜指紋圖譜質(zhì)控方法，可為地耳草樣品的質(zhì)量和品種鑒定提供全面的信息和檢測標(biāo)準(zhǔn)。不同產(chǎn)地及不同采收期地耳草樣品的HPLC指紋圖譜結(jié)果表明，產(chǎn)地不同

6、，地耳草樣品之間的相似度有一定的差異，這可能與地耳草生長的不同地理條件，不同氣候以及不同的品種有關(guān)，同一產(chǎn)地的地耳草樣品的高效液相指紋圖譜有較好的相似度，實現(xiàn)對地耳草藥材質(zhì)量的整體評價。
　　 7．建立了地耳草毛細(xì)管電泳指紋圖譜質(zhì)控方法，可為地耳草樣品的質(zhì)量和品種鑒定提供全面的信息和檢測標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)對地耳草藥材質(zhì)量的整體評價。
　　 8．HSGC-MS聯(lián)用技術(shù)對不同產(chǎn)地地耳草進行分析，測定其總離子流指紋圖譜，確定共有峰，并

7、對部分色譜峰進行了初步歸屬，初步建立了以12個共有峰為特征指紋信息的HSGC-MS指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)地耳草樣品之間的相似度有一定的差異。該方法準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可作為地耳草內(nèi)在質(zhì)量評價的依據(jù)。
　　 9．UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對不同產(chǎn)地地耳草進行分析，測定其總離子流圖譜，并對部分色譜峰進行了初步歸屬，通過與對照品及相關(guān)質(zhì)譜數(shù)據(jù)比較分析，初步鑒定其中8種黃酮類化合物，并用UPLC-DAD法對6種黃酮類化合物的含量同時測定。該方法準(zhǔn)確

8、可靠，重現(xiàn)性好，可作為地耳草內(nèi)在質(zhì)量評價的依據(jù)。
　　 10.不同采收期地耳草有效物質(zhì)的動態(tài)積累及變化規(guī)律研究。用現(xiàn)代分析技術(shù)，以有效成分定量分析結(jié)合指紋圖譜整體評價的模式，對不同生長時間地耳草中黃酮類成分、揮發(fā)性成分、無機元素等有效物質(zhì)的動態(tài)積累及變化規(guī)律進行分析研究，為確定藥材的適宜采收期提供科學(xué)依據(jù)。
　　 11.氣候因子對藥材有效物質(zhì)合成和積累的影響研究?？疾鞖夂蛞蜃樱鉁?、光照時數(shù)、降水量、相對濕度等），以藥材

9、中有效物質(zhì)黃酮類成分（總黃酮和蘆丁、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山柰酚等）、揮發(fā)性成分、無機元素的累積量為考核指標(biāo)，采用UV和HPLC、HPCE等對不同氣候因子作用下藥材有效物質(zhì)的變化及其規(guī)律進行研究，用逐步回歸法分析了氣候因子對有效物質(zhì)積累的影響，探討氣候因子與有效物質(zhì)積累的相關(guān)性。
　　 論文主要創(chuàng)新點：
　　 1、探究不同物候期地耳草有效物質(zhì)的動態(tài)積累及變化規(guī)律，為確定地耳草的最佳采收期提供依據(jù)；分析氣候因子與有效物

10、質(zhì)積累的相關(guān)性，揭示影響有效物質(zhì)含量主導(dǎo)因子，為優(yōu)質(zhì)藥材的生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。
　　 2、以多種有效成分同時定量分析結(jié)合指紋圖譜整體評價的模式，建立地耳草品質(zhì)和安全性的科學(xué)評價體系。
　　 3、首次建立地耳草中蘆丁、金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素及山柰酚6種活性成分同時測定的HPLC-DAD、HPCE-DAD分析方法。
　　 4、首次建立不同產(chǎn)地、不同采收期和不同種屬地耳草的HPCE-DAD、HSGC-MS指紋