2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、DEHP是塑料工業(yè)最主要的改性添加劑,全球年產(chǎn)量達(dá)300~400萬噸,廣泛應(yīng)用于各種塑料產(chǎn)品中。DEHP 僅依靠分子間作用力而不是化學(xué)鍵與塑料主體基質(zhì)結(jié)合,因此可不斷地從塑料制品中游離出來,通過各種途徑進(jìn)入人體。DEHP對人的急性毒性較低,慢性毒性尚不明確,但大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和一些流行病學(xué)研究提示DEHP及其代謝產(chǎn)物MEHP 可對發(fā)育中及成年個(gè)體的多種組織系統(tǒng)包括肝、生殖系統(tǒng)、腎、肺及心臟等產(chǎn)生廣泛的慢性毒性作用,并具有致畸性、致突變性和

2、致癌性。由于目前的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)沒有充分涵蓋對受試物的神經(jīng)毒性評價(jià),而處于發(fā)育階段的神經(jīng)系統(tǒng)對毒物作用更為敏感,因此本文以PC12細(xì)胞作為神經(jīng)元細(xì)胞模型,以C6細(xì)胞作為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞模型,研究DEHP、MEHP對神經(jīng)細(xì)胞增殖、分化過程的影響,對DEHP的神經(jīng)發(fā)育毒性作用進(jìn)行初步評價(jià)。
   第一部分
   目的:以未分化PC12細(xì)胞為模型,研究DEHP、MEHP對其增殖和分化過程的影響,從而評價(jià)其對神經(jīng)元的發(fā)育毒性。方法:對未

3、分化型PC12細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng);研究受試物的細(xì)胞增殖毒性時(shí),向各組加入含有不同濃度(0.1~100mg/L)DEHP 或MEHP的培養(yǎng)液,同時(shí)設(shè)立空白對照及0.1%DMSO的溶劑對照。對受試物細(xì)胞增殖毒性的評價(jià)方法包括:改良MTT 法檢測細(xì)胞生長曲線的影響、臺(tái)盼藍(lán)染料排斥法檢測活細(xì)胞百分比、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期以及流式細(xì)胞術(shù)和ELISA 法檢測細(xì)胞DNA 合成水平。研究受試物對細(xì)胞分化的影響時(shí),向各組加入含有50ng/mL 鼠2.5S 神

4、經(jīng)生長因子(NGF)及不同濃度(0.1~100mg/L)DEHP 或MEHP的培養(yǎng)液,同時(shí)設(shè)立空白對照及0.1%DMSO的溶劑對照。評價(jià)受試物對細(xì)胞分化影響的方法包括:鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并測定突起細(xì)胞陽性比例、分級(jí)分離獲取細(xì)胞膜蛋白和骨架蛋白并分別應(yīng)用BCA 法和Bradford 法測定其含量、提取PC12細(xì)胞總RNA 并以逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR 測定細(xì)胞ChAT mRNA、TH mRNA和GAPDH mRNA水平。結(jié)果:在實(shí)驗(yàn)濃

5、度范圍內(nèi),DEHP、MEHP對未分化型PC12細(xì)胞均無細(xì)胞毒性;0.1~100mg/L DEHP對未分化型PC12細(xì)胞的活力、細(xì)胞周期中各期細(xì)胞比例及細(xì)胞的DNA 合成水平均無影響;1.6~100mg/L MEHP降低未分化型PC12細(xì)胞的活力,且存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05);0.1~100mg/L MEHP 使細(xì)胞周期中S 期細(xì)胞比例降低,G2 期細(xì)胞比例升高,DNA 合成水平下降,且存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)。培養(yǎng)液中加入

6、鼠2.5S 神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化時(shí),1~100mg/L的DEHP和10~100mg/L MEHP 使分化中PC12細(xì)胞的膜蛋白、細(xì)胞骨架蛋白的含量增加,突起細(xì)胞陽性比例增加;以GAPDH mRNA為參照,實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)的DEHP和MEHP對ChAT mRNA水平?jīng)]有影響,對THmRNA水平起下調(diào)作用,且存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論:0.1~100mg/L的DEHP對未分化型PC12細(xì)胞的增殖沒有影響,而低至0.1m

7、g/L的MEHP 即可對未分化型PC12細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用。1~100mg/LDEHP和10~100mg/L MEHP 均可促進(jìn)NGF 誘導(dǎo)的未分化型PC12細(xì)胞向膽堿能交感神經(jīng)樣細(xì)胞分化。
   第二部分目的:以C6細(xì)胞為模型,研究DEHP及其代謝物MEHP對其增殖和分化過程的影響,從而評價(jià)其對神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育毒性。方法:對C6細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng);研究受試物的細(xì)胞增殖毒性時(shí),方法同第一部分。研究受試物對細(xì)胞分化的影響時(shí),向各組

8、加入含有2mM 丁酸鈉及不同濃度(0.1~100mg/L)DEHP 或MEHP的培養(yǎng)液,同時(shí)設(shè)立空白對照及0.1%DMSO的溶劑對照。評價(jià)受試物對細(xì)胞分化影響的方法包括:鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并測定延展細(xì)胞陽性比例、分離獲取細(xì)胞骨架蛋白并以Bradford 法測定其含量、提取C6細(xì)胞總RNA 并以逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR 測定細(xì)胞GFAP mRNA和GAPDH mRNA水平。結(jié)果:在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),DEHP、MEHP對C6細(xì)胞均無細(xì)胞毒

9、性;0.4mg/LDEHP 可以使細(xì)胞生長曲線提高但對細(xì)胞周期和DNA合成水平無影響;1.6~100mg/L DEHP對C6細(xì)胞的活力沒有影響;0.1~100mg/L DEHP對C6細(xì)胞的DNA 合成水平和細(xì)胞周期中各期細(xì)胞比例均無影響;1.6~100mg/L MEHP抑制C6細(xì)胞的活性,且存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05);0.1~100mg/L MEHP 使細(xì)胞周期中S 期細(xì)胞比例降低,G2 期細(xì)胞比例升高,DNA 合成水平下降,且存

10、在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)。培養(yǎng)液中加入丁酸鈉誘導(dǎo)C6細(xì)胞分化時(shí),1~100mg/L的DEHP和10~100mg/L MEHP 使分化中C6細(xì)胞的細(xì)胞骨架蛋白含量增加,延展細(xì)胞陽性比例升高(P<0.05);以GAPDH mRNA為參照,1~100mg/L的DEHP和MEHP上調(diào)GFAPmRNA水平,且存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論:0.1~100mg/L的DEHP對C6細(xì)胞的增殖沒有影響,而低至0.1mg/L的MEHP 即可

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