Th17-Treg亞群失衡在深靜脈血栓形成中的作用及綠原酸干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：從Thl7/Treg亞群失衡角度，探討DVT發(fā)病過程中免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，闡釋中藥單體綠原酸逆轉(zhuǎn)Thl7/Treg亞群失衡治療DVT的作用與關(guān)鍵分子機(jī)制，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：根據(jù)Reyers法建立大鼠DVT模型，于造模術(shù)后第1d分別給予綠原酸40、20、10 mg/kg及等量生理鹽水灌胃，并設(shè)立假手術(shù)組及正常對照組。于造模后第3d、7d，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組大鼠脾臟Th17亞群、Treg亞群比例，ELISA法檢測大

2、鼠外周血IL-17、TGF-β、D-二聚體蛋白水平，RT-PCR法分析IL-17 mRNA、TGF-βmRNA轉(zhuǎn)錄水平。檢測大鼠DVT模型靜脈血栓干、濕重。分析DVT大鼠模型Th17/Treg比值、IL-17、TGF-β與血栓干、濕重及D-二聚體水平的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.造模后第3d大鼠DVT模型中存在Th17亞群比例升高，Treg亞群比例降低， Th17/Treg比值升高。綠原酸治療后，DVT大鼠Th17亞群比例

3、降低，Treg亞群比例升高，Th17/Treg比值降低；綠原酸對DVT大鼠Th17/Treg調(diào)節(jié)的作用呈顯著劑量依賴性，隨著劑量增大，效果增加（P<0.05）。綠原酸大劑量組IL-17蛋白水平低于綠原酸中劑量、綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），TGF-β蛋白水平高于綠原酸中劑量、綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05）。綠原酸大劑量、綠原酸中劑量組 IL-17 mRNA水平低于綠原酸小劑量組， TGF-β mRNA水平高

4、于綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸大劑量組與綠原酸中劑量組比較，差異無顯著性（P＞0.05）。綠原酸大劑量組D-二聚體水平低于綠原酸中劑量、綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸中劑量組與綠原酸小劑量組比較，差異無顯著性（P＞0.05）。綠原酸大劑量、綠原酸中劑量組血栓干、濕重均低于綠原酸小劑量、生理鹽水組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸大劑量組與綠原酸中劑量組比較，有顯著性差異（P<0.05）。

5、
　　2.造模后第7d綠原酸大劑量組Th17亞群比例低于綠原酸中劑量、綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05）；綠原酸中劑量組與綠原酸小劑量組比較，有顯著性差異（P<0.05）。綠原酸大劑量組Treg亞群比例高于綠原酸中劑量組，綠原酸中劑量組高于綠原酸小劑量組，均有顯著性差異（P<0.05）。綠原酸大劑量組Th17/Treg與綠原酸中劑量組比較，綠原酸中劑量組與綠原酸小劑量組比較，綠原酸小劑量組與生理鹽水組比較，有顯著性差異（

6、P<0.05）。綠原酸大劑量、綠原酸中劑量組IL-17水平低于綠原酸小劑量組，TGF-β蛋白水平高于綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸大劑量組與綠原酸中劑量組比較，有顯著性差異（P<0.05）。綠原酸大劑量、綠原酸中劑量組IL-17 mRNA水平低于綠原酸小劑量組，TGF-βmRNA水平高于綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸大劑量組與綠原酸中劑量組比較，有顯著性差異（P<0.05）。綠原酸大劑量組D-

7、二聚體水平低于綠原酸中劑量、綠原酸小劑量組，有顯著性差異（P<0.05），綠原酸中劑量組與綠原酸小劑量組比較，差異無顯著性（P>0.05）。綠原酸大劑量組血栓干、濕重低于綠原酸中劑量組，綠原酸中劑量組低于綠原酸小劑量組，均有顯著性差異（P<0.05）。相關(guān)性分析：Th17/Treg與血栓濕重、干重及D-二聚體水平呈正相關(guān)（r=0.5927，0.5160，0.4205，P<0.01）；IL-17與血栓濕重、干重及D-二聚體水平呈正相關(guān)（r

8、=0.5716，0.6124，0.3412，P<0.01）；TGF-β與血栓濕重、干重及 D-二聚體水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.4785，-0.4650，-0.2617，P<0.01）。
　　結(jié)論：DVT大鼠存在Th17/Treg亞群偏移現(xiàn)象，Th17亞群明顯升高，Treg亞群明顯降低。綠原酸干預(yù)后，Th17/Treg偏移現(xiàn)象明顯逆轉(zhuǎn)，綠原酸對DVT大鼠Th17/Treg亞群失衡具有調(diào)節(jié)作用，優(yōu)勢誘導(dǎo)Th17/Treg向Treg亞群偏