改性茶皂素-鹽雙水相體系的構建及對牛血清蛋白分配行為的研究.pdf

1、傳統的雙水相體系成相物（葡聚糖、聚乙二醇）具有價格昂貴、粘度大等特點極大地限制了雙水相體系的應用。尋求廉價、易得、低粘度的雙水相體系，已成為雙水相體系工作的研究熱點。本文中，發(fā)現了一種新型廉價的雙水相體系—丁基茶皂素/鹽體系，研究了該雙水相體系的成相特點，并對牛血清蛋白(BSA)在該體系中的分配行為進行了研究。本實驗的主要內容如下:
　　 1、(1)合成了丁基茶皂素和環(huán)氧丙基茶皂素，并采用L16(45)正交試驗優(yōu)化了合成條件。得

2、出最佳反應條件分別為:反應溫度70℃，催化劑質量分數10％，堿化處理時間1.5 h，茶皂素與正溴丁烷摩爾比1∶8，反應時間為6h，產率最高為81.2％。反應溫度70℃，催化劑質量分數20-30％，堿化處理時間1h，茶皂素與環(huán)氧氯丙烷的摩爾比1∶8，反應時間8h，產率最高為80.8％。并采用改性茶皂素進行成相分析，結果顯示丁基茶皂素具有成相能力，環(huán)氧丙基茶皂素沒有成相能力。
　　 (2)采用差熱-熱重(DSC-TG)、紅外光譜(I

3、R)和紫外光譜(UV)對丁基茶皂素的結構進行表征。差熱分析結果表明丁基茶皂素的熱降解過程發(fā)生較大變化，穩(wěn)定性小于茶皂素;紅外分析結果表明丁基茶皂素在2957 cm-1,2870 cm-1,2924 cm-1,2854 cm-1,1375 cm-1,1504cm-1，717 cm-1有特征吸收;紫外分析結果表明丁基茶皂素特征吸收在201 nm處，茶皂素紫外特征吸收在210 nm處。
　　 2.繪制了丁基茶皂素/鹽雙水相相圖，研究了

4、該體系相體積比變化、相圖系線長度、相圖系線斜率，以及溫度、pH對成相效果的影響。并對該體系上下相粘度進行了測定。
　　 (1)相圖構建的研究結果表明隨著丁基茶皂素含量增加，分相所需鹽（硫酸銨、硫酸鈉、檸檬酸鈉）含量逐漸降低，鹽析能力遵循以下順序:硫酸鈉＞檸檬酸鈉＞硫酸銨;
　　 (2)丁基茶皂素與鹽（硫酸銨、檸檬酸鈉）相體積比變化的研究結果表明:隨著丁基茶皂素含量增加，相體積比增大，而隨著鹽含量增加相體積比減小。丁基茶皂

5、素與鹽（硫酸銨、檸檬酸鈉）上下相體積比變化范圍分別為0.9-1.15和0.65-1.05;
　　 (3)相圖系線長度(TLL)則隨著丁基茶皂素含量增加而變大，成相區(qū)域變大，丁基茶皂素/硫酸銨體系的成相區(qū)域大于丁基茶皂素/檸檬酸鈉體系的成相區(qū)域;
　　 (4)相圖系線斜率(STL)則隨著丁基茶皂素含量增加而降低，丁基茶皂素/檸檬酸鈉體系成相受檸檬酸鈉含量影響較大，丁基茶皂素/硫酸銨體系成相受丁基茶皂素含量影響較大;

6、　　 (5) pH對成相影響的研究結果表明:丁基茶皂素/鹽（硫酸銨、檸檬酸鈉）成相所需鹽含量先降低后升高，在pH＝6.2時兩體系成相所需鹽含量最低;
　　 (6)溫度對丁基茶皂素/鹽的影響結果表明:丁基茶皂素/鹽（硫酸銨、檸檬酸鈉）成相隨著溫度的升高，成相所需鹽含量降低，最佳溫度為30℃;
　　 (7)丁基茶皂素/鹽（硫酸銨、檸檬酸鈉）粘度的測定結果表明:PEG2000/鹽（硫酸銨和檸檬酸鈉）體系所形成的雙水相體系上相

7、的粘度范圍為70-110 mpa·s，下相的粘度范圍為15-60 mpa·s，上相粘度高于下相粘度。丁基茶皂素/鹽（硫酸銨和檸檬酸鈉）所形成雙水相體系上相的粘度范圍為1.0-1.5 mpa·s，下相的粘度范圍為0.6-1.5mpa.s。
　　 3.(1)紫外光譜法研究了不同濃度丁基茶皂素對BSA（牛血清蛋白）-G250（考馬斯亮藍）吸收波長的影響，研究結果表明:當丁基茶皂素濃度小于1.0×10-3g·mL-1時，對BSA-G25

8、0的吸收影響較小，當丁基茶皂素濃度大于1.0×10-3 g·mL-1，BSA-G250吸收發(fā)生藍移;
　　 (2) BSA-G250的分配機理研究結果表明:BSA-G250既分布在丁基茶皂素分子間，也分布在丁基茶皂素所形成的微觀結構內;
　　 (3)丁基茶皂素含量、pH、溫度對BSA-G250的分配行為影響結果表明:隨著丁基茶皂素含量的增加，丁基茶皂素/鹽（硫酸銨和檸檬酸鈉）雙水相體系分配系數逐漸增大;隨著溫度的升高，丁