東北雅羅魚微衛(wèi)星分子標(biāo)記的篩選及雅羅魚5個野生群體遺傳多樣性分析.pdf

1、通過磁珠富集法篩選東北雅羅魚(LeuciscuswaleckiiDybowski)的微衛(wèi)星分子標(biāo)記。采用限制性內(nèi)切酶Sau3AI對東北雅羅魚基因組DNA進(jìn)行酶切，選取400～900bp的片段進(jìn)行PCR全基因組擴(kuò)增，并利用生物素標(biāo)記的(CAG)8、(TGA)8、(AGAT)6、和(GATT)6四個探針進(jìn)行微衛(wèi)星片段的富集。將得到的片段與T載體連接后轉(zhuǎn)入DH5α大腸桿菌中，菌落PCR法篩選陽性克隆，最后挑取擴(kuò)增片段大小符合條件的1416個克

2、隆菌落送生物公司測序。測序結(jié)果顯示，在1047個測序成功的陽性克隆中，含微衛(wèi)星序列的克隆有774個(73.94％)。經(jīng)統(tǒng)計，在這774個克隆中共獲得1084個微衛(wèi)星位點，其中完美型737個(67.99％)，非完美型166個(15.31％)，混合型181個(16.70％)。選取側(cè)翼序列符合引物設(shè)計條件的微衛(wèi)星序列160個，結(jié)果成功設(shè)計微衛(wèi)星引物105對。引物篩選發(fā)現(xiàn)，56對引物可擴(kuò)增出清晰條帶，但只有23對引物具有多態(tài)性。選取其中18對多

3、態(tài)性引物對達(dá)里湖東北雅羅魚群體進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果顯示等位基因數(shù)在3～11之間，觀測雜合度(Ho)和期望雜合度(He)的平均值分別為0.6056和0.6286，多態(tài)信息含量(PIG)在0.2077～0.8820之間，67％(12對/18對)的位點處于高度多態(tài)水平(PIC>0.5)。
　　 采用微衛(wèi)星分子標(biāo)記的方法，利用24個微衛(wèi)星分子標(biāo)記對雅羅魚5個野生群體(貝加爾雅羅魚、達(dá)里湖東北雅羅魚、高體雅羅魚、灘頭雅羅魚、松花江東北雅羅魚)進(jìn)

4、行遺傳多樣性分析，以期對其種質(zhì)資源進(jìn)行有目的保護(hù)，為遺傳育種等提供理論依據(jù)。共檢測了雅羅魚5個野生群體，共203個個體，24個位點的微衛(wèi)星。其中，位點HLJYL002和HLJYL106分別只能在高體雅羅和松花江群體中擴(kuò)增，而在其它群體中表現(xiàn)為大量的位點缺失；位點HLJYL007、HLJYL031、HLJYL042、HLJYL048、HLJYL052、HLJYL092、HLJYL100、HLJYL101、HLJC114和HLJC116分別

5、只在一個群體中表現(xiàn)為位點丟失，但在其它群體中均能擴(kuò)增。在所研究的多態(tài)位點中，5個群體的平均等位基因數(shù)A為7.78～11.65，平均有效等位基因數(shù)為Ne為4.91～6.81，平均觀察雜合度Ho為0.6043～0.7077，平均期望雜合度He為0.7618～0.8313，平均多態(tài)信息含量PIC為0.7174～0.7970。
　　 通過基因型x2檢驗發(fā)現(xiàn)貝加爾群體在位點HLJYL035、HLJYL048，達(dá)里湖群體在位點HLJYL03