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1、該文嘗試了降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)衍生物的純化路線,并用CGRP衍生物直接注射人工腎性高血壓狗(ARHB),取得了理想的預(yù)期降壓效果.單體CGRP衍生物對(duì)ARHB的降壓效果:將CGRP基因克隆到表達(dá)質(zhì)粒pGEX上,連續(xù)在pGEX上的GST基因之后,在E.coliC<,600>中以可溶性的融合蛋白形式表達(dá).多拷貝CGRP衍生物對(duì)ARHB的降壓效果:將三個(gè)CGRP基因串聯(lián)后,再克隆到pGEX上的GST基因之后,融合蛋白在E.coliC<
2、,600>中以不溶性的包含體的形式表達(dá).37℃培養(yǎng)8小時(shí),表達(dá)量高達(dá)33﹪,該文通過(guò)一系列包含體的洗滌,8M尿素抽提包含體經(jīng)Q-sepharose含6M尿素的洗脫液梯度洗脫一步分離純化,得到純度達(dá)80﹪的GST-3CGRP融合蛋白,復(fù)性后經(jīng)Glutathione-Sepharose4B吸附,Thrombin酶切后得到串聯(lián)CGRP衍生物純度高達(dá)90﹪以上.HPLC單一峰,Tris-tricine小分子量蛋白電泳一條帶,質(zhì)譜分析證實(shí)分子量正
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