姜黃素對(duì)活性氧所致精子DNA損傷的保護(hù)作用.pdf

1、第一章、姜黃素對(duì)次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶所致人精子DNA損傷的保護(hù)作用
　　 目的：探討活性氧對(duì)精子DNA損傷的機(jī)制，研究姜黃素對(duì)活性氧(reactiveoxygen species，ROS)所致精子DNA損傷的保護(hù)作用，以期尋找一種安全有效的防治精子DNA損傷的藥物。
　　 方法：應(yīng)用體外培養(yǎng)的方法，經(jīng)密度梯度離心法優(yōu)選后的精子作為正常精子模型，采用次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶(HX-XO)體系產(chǎn)生活性氧(ROS)，然后在有氧

2、環(huán)境下，將不同濃度的姜黃素與之共同孵育后，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測(cè)定精子懸液中ROS含量，采用精子計(jì)算機(jī)輔助分析法(Computer-aided sperm analysis，CASA)檢測(cè)精子活動(dòng)率，Diff-Quik染色法進(jìn)行精子形態(tài)分析，通過(guò)精子尾部低滲膨脹試驗(yàn)評(píng)估精子膜功能，通過(guò)吖啶橙熒光染色測(cè)定精子DNA損傷程度，并與已知的抗氧化劑VitC對(duì)照。
　　 結(jié)果：姜黃素低、中、高劑量(1、10、100μg/ml

3、)在相同的條件下均可降低精子懸液活性氧(ROS)含量，顯示對(duì)ROS所致精子DNA的氧化損傷均具有不同程度的預(yù)防作用，對(duì)精子膜功能及其精子DNA具有一定的保護(hù)作用。姜黃素對(duì)精子DNA的保護(hù)作用呈雙向性，中劑量(10μg/ml)時(shí)作用最顯著。
　　 結(jié)論：
　　 1.在精子體外培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中添加適當(dāng)?shù)目寡趸镌诒苊饩踊盍ο陆岛鸵种凭幽み^(guò)氧化損傷方面具有一定作用。
　　 2.姜黃素對(duì)活性氧所致人精子DNA具有明顯

4、的保護(hù)作用，其作用機(jī)制與降低ROS含量、抗脂質(zhì)過(guò)氧化物產(chǎn)生有關(guān)。
　　 3.當(dāng)姜黃素的濃度達(dá)到一定濃度時(shí)，可從抗氧化劑轉(zhuǎn)換成促氧化作用。
　　 第二章、研究姜黃素對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠精子DNA損傷的保護(hù)作用
　　 目的：探討環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)對(duì)精子DNA損傷的機(jī)制，研究姜黃素對(duì)CTX所致精子DNA損傷的保護(hù)作用，以期尋找一種安全有效的防治精子DNA損傷的藥物。
　　 方法：

5、選用清潔級(jí)昆明雄性小鼠隨機(jī)分為6組，其中對(duì)照組小鼠每天給予維生素C50mg/kg.d灌胃;姜黃素低、中、高組小鼠每天給予姜黃素混懸液100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg灌胃;正常組小鼠及0mg/kg Cur組予等量的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，各組均連續(xù)處理28天，給藥的同時(shí)除了正常組外其余各組均按照40mg/kg.d腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)，連續(xù)5天。末次給藥24 h后采用頸椎脫臼法處死小鼠，處死前1小時(shí)給予Br

6、du腹腔注射后，取雙側(cè)睪丸組織及附睪。常規(guī)HE染色切片觀察睪丸細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變及Brdu免疫組化觀察睪丸細(xì)胞凋亡情況，制備睪丸組織勻漿檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)含量、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量，制備精子懸液檢測(cè)精子活動(dòng)率、形態(tài)學(xué)分析、精子膜功能及精子DNA損傷情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.睪丸組織的病理學(xué)觀察光鏡下正常組睪丸生精上皮呈規(guī)則圓形，排列緊密，結(jié)構(gòu)清晰，層次分明

7、，精原細(xì)胞大而圓，規(guī)則地緊貼曲細(xì)精管的基底膜，向內(nèi)依次為初級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。0mg/kg Cur組睪丸曲細(xì)精管排列稍稀疏，間質(zhì)水腫，管腔內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞數(shù)量減少，層次減少，排列混亂，初級(jí)精母階段不分化，管腔內(nèi)無(wú)成熟精子。姜黃素組睪丸的生精功能損傷較輕，可見初級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。
　　 2.睪丸組織勻漿氧化標(biāo)志物水平結(jié)果與正常組相比，0mg/kg Cur組睪丸組織中SOD、GSH-Px含量均有明顯降低(P＜0.05

8、)，MDA、ROS含量均有明顯升高(P＜0.01);經(jīng)姜黃素干預(yù)后，睪丸組織中SOD、GSH-Px含量均有明顯升高（P＜0.05），MDA、ROS含量均有明顯下降(P＜0.05)。
　　 3.精子的活動(dòng)率、畸形率、低滲腫脹率比較與正常組相比，0mg/kg Cur組精子活動(dòng)率、低滲腫脹率均明顯下降（P＜0.05)，精子的畸形率均顯著升高（P＜0.01）:經(jīng)姜黃素干預(yù)后，其精子活動(dòng)率、低滲腫脹率均顯著升高（P＜0.01)，精子的畸形

9、率明顯減低（P＜0.05）。
　　 4.精子DNA完整性的比較與正常組相比，0mg/kg Cur組精子DNA完整性顯著下降（P＜0.05），經(jīng)姜黃素干預(yù)后其精子DNA的完整性均明顯提高(P＜0.05)。
　　 5.睪丸組織Brdu免疫組化觀察深棕色為陽(yáng)性細(xì)胞（增殖細(xì)胞），0mg/kg Cur組增殖細(xì)胞含量明顯少于其它各組，正常組及100，150，200mg/kg Cur處理組可見數(shù)目較多的增殖細(xì)胞。
　　 結(jié)論：

10、
　　 1.用腹腔注射環(huán)磷酰胺法建立小鼠睪丸氧化損傷的動(dòng)物模型;在體內(nèi)可使睪丸組織氧化和抗氧化能力失衡，即抗氧化能力降低，氧自由基堆積。
　　 2.姜黃素可以降低小鼠睪丸局部氧化產(chǎn)物ROS、MDA的生成，并增加抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量，提高組織的抗氧化能力，保護(hù)睪丸結(jié)構(gòu)功能。
　　 3.姜黃素可通過(guò)對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生保護(hù)精子膜的功能，從而提高精子的活動(dòng)率及精子DNA的完整性。
　　 4.姜黃