姜黃素對(duì)氧化損傷的小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激已被證實(shí)與神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理密切相關(guān)。姜黃素是一種從姜科植物中提取的天然多酚類抗氧化物質(zhì)。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于姜黃素對(duì)氧化損傷神經(jīng)元細(xì)胞的保護(hù)作用的報(bào)道比較少，其作用機(jī)理，尤其是細(xì)胞水平的機(jī)理也不是很清楚。在本研究中，利用H2O2誘導(dǎo)氧化損傷的小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞Neuro-2A模型探討姜黃素的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)理。
　　 將Neuro-2A細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板中,37℃培養(yǎng)過(guò)夜，不同濃度姜黃素預(yù)孵育1 h，繼而

2、30 μmol/L H2O2 作用24 h。細(xì)胞存活率的測(cè)定采用MTT法，結(jié)果顯示25 μg/ml姜黃素預(yù)孵育1 h可使30 μmol/L H2O2 處理24 h后的細(xì)胞存活率提高8.5％；細(xì)胞凋亡的檢測(cè)使用核染色法，結(jié)果顯示姜黃素可顯著抑制H2O2 誘導(dǎo)的Neuro-2A細(xì)胞凋亡，姜黃素預(yù)孵育1 h可使細(xì)胞凋亡率下降15.1％；細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力的測(cè)定采用比色法，結(jié)果顯示25 μg/ml姜黃素能夠使細(xì)胞內(nèi)總抗氧化能力提高15.9％。應(yīng)

3、用流式細(xì)胞術(shù)研究細(xì)胞內(nèi)ROS堆積、線粒體跨膜電位崩塌以及胞外鈣離子內(nèi)流情況，結(jié)果顯示姜黃素能夠抑制細(xì)胞內(nèi)ROS過(guò)量生成和胞外鈣離子內(nèi)流，同時(shí)可使羅丹明123陰性細(xì)胞數(shù)比例降低11.81％，即有助于維持正常的線粒體跨膜電位；抗凋亡蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)采用Western blot法，結(jié)果顯示預(yù)孵育25 μg/ml姜黃素1 h可提高抗凋亡蛋白PARP和 Bcl-2的表達(dá)量，與H2O2 處理組相比，這兩種蛋白在細(xì)胞內(nèi)的含量分別提高了12.1％和1

4、2.0％；Western blot法與胞漿/胞核蛋白分離法結(jié)合用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)與凋亡及炎癥反應(yīng)相關(guān)的NF-κB信號(hào)通路的激活情況，發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠抑制H2O2引起的IκBα降解，進(jìn)而阻止NF-κB激活，因此抑制其下游目的基因COX-2的表達(dá)，與H2O2 處理組相比,25 μg/ml姜黃素預(yù)孵育1 h可使細(xì)胞內(nèi)IκBα含量提高34.3％，抑制NF-κB活化及進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)而使得炎癥因子COX-2表達(dá)量降低31.0％。
　　 總而言之，