氫水對(duì)急性馬尾綜合征大鼠神經(jīng)元損害抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、馬尾綜合征目前尚無(wú)有效臨床治療方法，因其一旦出現(xiàn)，將迅速發(fā)生不可逆的神經(jīng)損害，錯(cuò)過(guò)最佳手術(shù)時(shí)機(jī)后，即使手術(shù)解除馬尾壓迫，患者運(yùn)動(dòng)功能大多數(shù)能夠恢復(fù)，但大、小便、性功能及鞍區(qū)感覺(jué)障礙難以恢復(fù)，致殘率非常高，給患者本人造成了極大的痛苦，也給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。由于馬尾綜合征的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，目前對(duì)該病的研究相對(duì)較少而且緩慢。有研究顯示，氧應(yīng)激反應(yīng)在神經(jīng)元凋亡中發(fā)揮重要作用，而氫氣的選擇性抗氧化效應(yīng)對(duì)氧應(yīng)激損傷具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，

2、其在馬尾神經(jīng)壓迫后造成神經(jīng)元凋亡中是否具有抑制神經(jīng)元凋亡的作用尚無(wú)研究。研究氫氣是否能通過(guò)抗氧化應(yīng)激損傷而抑制或者延緩急性馬尾綜合征不可逆的神經(jīng)損害發(fā)生，并逐步研發(fā)新藥應(yīng)用于臨床治療馬尾綜合征，具有重要的理論及現(xiàn)實(shí)意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究將建立馬尾綜合征動(dòng)物模型，通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)、組織病理學(xué)、免疫組化及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析等多種方法，研究氫生理鹽水在急性馬尾綜合征中的抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、抑制神經(jīng)元凋亡及神經(jīng)保護(hù)作用，并與臨床常用急性神經(jīng)損傷保護(hù)

3、藥物甲強(qiáng)龍進(jìn)行對(duì)比，為臨床治療馬尾綜合征提供基礎(chǔ)研究，為逐步研發(fā)新藥治療馬尾綜合征提供理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 1.檢驗(yàn)急性馬尾綜合征動(dòng)物模型的可靠性，通過(guò)劑量梯度實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)氫生理鹽水對(duì)急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有影響作用，并確定合適的使用劑量。
　　 2.通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)觀察，初步證實(shí)氫生理鹽水對(duì)急性馬尾綜合征大鼠的神經(jīng)損害具有抑制作用，并確定合理的實(shí)驗(yàn)時(shí)間分組。
　　 3.研究急性馬尾綜

4、合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化規(guī)律及氫生理鹽水對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)的抑制作用。
　　 4.研究氫生理鹽水治療后急性馬尾綜合征大鼠的組織病理、免疫組化等變化，證實(shí)氫生理鹽水可以抑制神經(jīng)元的凋亡，對(duì)急性馬尾壓迫導(dǎo)致神經(jīng)損害具有保護(hù)作用。
　　 5.通過(guò)與臨床藥物甲強(qiáng)龍進(jìn)行對(duì)比，評(píng)估氫生理鹽水的療效及應(yīng)用前景。
　　 方法：
　　 1.建立硅膠條壓迫馬尾的SD大鼠動(dòng)物模型，并通過(guò)行為學(xué)評(píng)價(jià)、組織形態(tài)學(xué)觀察驗(yàn)證該動(dòng)物模型

5、可應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)研究。
　　 2.分別使用2.5ml/kg、5ml/kg、7.5ml/kg 梯度劑量的氫生理鹽水腹腔注射，檢測(cè)大鼠的GSH 含量變化，確定氫生理鹽水的合適劑量,再分別于3h、6h、12h、24h 檢測(cè)GSH 含量變化，初步驗(yàn)證氫生理鹽水對(duì)馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有影響作用，并確定氫生理鹽水使用頻率。
　　 3.在3h、6h、12h、24h、48h、72h、1周、2周、3周、4周、8周、12周行BBB

6、評(píng)分和熱板實(shí)驗(yàn)觀察行為學(xué)改變，證實(shí)氫生理鹽水對(duì)急性馬尾綜合征大鼠的神經(jīng)損害具有抑制作用，并根據(jù)變化規(guī)律確定較合理的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)間分組。
　　 4．分別于3h、6h、12h、24h、48h、72h 取T13-L1段脊髓、L4-L6 段馬尾神經(jīng)及L5、L6 雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)，行MDA及GSH 檢測(cè)。研究急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化規(guī)律，證實(shí)氫生理鹽水對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)具有抑制作用。
　　 5．于48h 取T13-L1段脊髓

7、及L5、L6 雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)行HE、Caspases 3、Bax及Tunel 染色，取L4-L6 段馬尾神經(jīng)行NF 染色，證實(shí)氫生理鹽水可以抑制神經(jīng)元的凋亡，對(duì)急性馬尾壓迫導(dǎo)致神經(jīng)損害具有保護(hù)作用。
　　 6．通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)評(píng)價(jià)、MAD及GSH 檢測(cè)、HE、NF、Caspases 3、Bax及Tunel 染色等指標(biāo)對(duì)氫生理鹽水、甲強(qiáng)龍、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療進(jìn)行對(duì)比，評(píng)估氫生理鹽水與甲強(qiáng)龍?jiān)诩毙择R尾綜合征神經(jīng)保護(hù)作用中的療效。

8、r>　　 結(jié)果：
　　 1.馬尾綜合征SD大鼠動(dòng)物模型制模方便，死亡率低，可觀察到馬尾壓迫后大體病理變化，與對(duì)照組相比，各項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)均符合實(shí)驗(yàn)所需。
　　 2.氫生理鹽水梯度劑量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)5ml/kg 劑量對(duì)GSH水平影響最大，確定氫水的用量為5ml/kg。而各時(shí)間組中，3h和6h組的GSH水平與壓迫組有明顯差異，而12h和24h組無(wú)明顯差異，由此考慮氫水代謝時(shí)間為6-12h 之間，確定氫水的使用頻次為1次/ 8h。

9、
　　 3.根據(jù)BBB 評(píng)分和熱板實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)3h組因麻醉蘇醒時(shí)間不一致而結(jié)果差異太大，48h 至3月組BBB 評(píng)分和熱板實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，由此確定合適的實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)分組為：6h、12h、24h、48h組。
　　 4.與壓迫組相比，氫生理鹽水組脊髓、馬尾及背根神經(jīng)節(jié)的MDA水平更低，GSH水平更高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。壓迫3h組MDA及GSH 變化最大，氫生理鹽水24h組MDA及GSH 變化最大,均為48h 達(dá)到峰值，氫

10、生理鹽水推遲了氧化應(yīng)激反應(yīng)的加劇時(shí)間。
　　 5．與壓迫組相比，氫生理鹽水組HE 染色顯示出更好的組織形態(tài)，馬尾NF陽(yáng)性率更高，而脊髓及背根神經(jīng)節(jié)的Caspases 3和Bax 陽(yáng)性指數(shù)、Tunel細(xì)胞凋亡指數(shù)均更低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6．與壓迫組相比，BBB 評(píng)分和熱板實(shí)驗(yàn)、MAD和GSH水平、HE、NF、Caspases 3、Bax及Tunel 染色等指標(biāo)，氫生理鹽水組、甲強(qiáng)龍組、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療組均有明

11、顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義改變，而氫生理鹽水組、甲強(qiáng)龍組、氫水和甲強(qiáng)龍混合治療組之間無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.馬尾綜合征SD大鼠模型具有較好的耐受性，具備較好的可操作性與可重復(fù)性，較接近臨床的發(fā)病情況，能反映神經(jīng)受損的神經(jīng)生理和運(yùn)動(dòng)行為的情況。
　　 2.急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)3h 變化最大，48h 達(dá)到峰值，氫生理鹽水對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)具有抑制作用。
　　 3.氫生理鹽水對(duì)神經(jīng)元凋亡具有抑