表達(dá)傳染性法氏囊病毒VP5蛋白的DF-1細(xì)胞的質(zhì)膜蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)感染引起的一種高度接觸性傳染病，主要侵害3-6周齡雛雞的法氏囊中樞免疫器官，導(dǎo)致以淋巴細(xì)胞衰竭、壞死為主要特征的一種免疫缺陷性和免疫抑制性疾病，是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。IBDV編碼的VP5蛋白可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與成熟病毒從胞內(nèi)釋放到胞外及病毒的致病性有關(guān)，缺失VP5的研究成為防治IBDV的有效策略。聚集于細(xì)胞質(zhì)膜上的IBDV/VP5蛋白對質(zhì)膜組分的構(gòu)成有何影響，以至是

2、否影響質(zhì)膜的功能，至今缺少具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本研究借助蛋白質(zhì)組學(xué)方法對表達(dá)IBDV/VP5蛋白的細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以期在蛋白質(zhì)組層面揭示VP5表達(dá)下細(xì)胞質(zhì)膜的變化，為探索IBDV的浸染和釋放機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 二維凝膠電泳(2-DE)是一項(xiàng)被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜樣品分離的傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組學(xué)分離技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)中，以脂質(zhì)體2000介導(dǎo)質(zhì)粒DNA體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染體系將IBDV/VP5基因?qū)隓F-1細(xì)胞，抽提細(xì)胞的質(zhì)膜進(jìn)行2-DE電泳分析，

3、與正常細(xì)胞比較，從轉(zhuǎn)染VP5基因的細(xì)胞中獲得了45個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)，包括33個(gè)表達(dá)上調(diào)蛋白點(diǎn)和12個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白點(diǎn)。挖取18個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜鑒定，對應(yīng)15種蛋白的17個(gè)蛋白點(diǎn)（12種表達(dá)上調(diào)蛋白和5種表達(dá)下調(diào)的蛋白）被鑒定成功。數(shù)據(jù)庫搜索和對鑒定蛋白的功能分析表明，這些差異蛋白主要涉及信號傳導(dǎo)、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、離子通道蛋白。熒光實(shí)時(shí)PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示，差異表達(dá)蛋白基因轉(zhuǎn)錄本的變化趨勢與蛋白一致。此外，用We