桑葚體外模擬消化產(chǎn)物對肝臟細胞損傷的保護效應及其機理研究.pdf

1、桑葚是一種“藥食同源”的漿果，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，具有諸多保健功能。為科學評價桑葚的營養(yǎng)價值和生物活性，本文結(jié)合體外模擬胃腸道消化模型和氧化損傷細胞模型研究了桑葚中的生物活性成分及其抗氧化活性，并圍繞桑葚體外模擬胃腸道消化產(chǎn)物對抗丙烯酰胺誘導肝臟細胞損傷的保護效應及其相關機制進行了研究。主要結(jié)果如下：
　　(1)體外模擬胃腸道對桑葚活性成分含量及抗氧化活性的影響
　　100g桑葚鮮果經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，30

2、0mL體外消化產(chǎn)物（生物可利用部分）中酚類、黃酮、花色苷、原花青素的含量分別為463.88±5.81mg沒食子酸當量、363.51±6.73mg蘆丁當量、71.58±2.29mg矢車菊素-3-葡萄糖苷當量、217.43±7.01mg兒茶素當量，具有較好的體外及細胞水平抗氧化能力。與桑葚胃消化產(chǎn)物（Mulberry gastric digest，MBG）相比，桑葚腸消化產(chǎn)物(Mulberrygastrointestinal digest，

3、MBD)的酚類、花色苷、原花青素含量分別減少了3.24％、76.02％、61.85％，黃酮含量增加了53.91％，體外和細胞水平抗氧化能力均明顯高于MBG;與桑葚醇提物(Mulberry ethanol extracts，MBE)，即桑葚未消化組相比，MBD中的酚類、花色苷、原花青素含量顯著低于MBE，但黃酮含量高于MBE2.63％，體外抗氧化能力相當或低于MBE，但細胞水平抗氧化能力則明顯高于MBE。
　　(2)桑葚體外消化產(chǎn)物

4、(MBD)對丙烯酰胺（Acrylamide，AA）誘導肝臟細胞（HepG2）損傷的保護作用
　　采用MTT法測定細胞增殖活力，結(jié)果表明5mM丙烯酰胺（AA處理組）作用HepG224h后，細胞存活率僅為空白對照組的50.68％;與AA處理組相比，1mg/mL MBD、MBE處理組的細胞存活率分別提高了6.78％和21.88％(P＜0.01);通過動態(tài)熒光可視技術、分子探針等現(xiàn)代分子細胞學技術檢測細胞內(nèi)活性氧自由基(Reactive

5、oxygen species，ROS)含量、谷胱甘肽水平、線粒體膜脂質(zhì)氧化、線粒體膜電位、細胞核損傷，研究發(fā)現(xiàn)1 mg/mL MBE、MBD可有效清除AA誘導的ROS，恢復谷胱甘肽水平，緩解了由AA誘導的氧化應激損傷，減輕線粒體膜脂質(zhì)氧化損傷，恢復線粒體膜電位，抑制細胞核損傷，從而維持細胞功能正常，起到保護作用。
　　(3)桑葚體外消化產(chǎn)物和丙烯酰胺對HepG2細胞抗氧化酶活性及Nrf2-ARE通路相關基因表達的影響
　　H

6、epG2細胞經(jīng)AA作用后，超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)和過氧化氫酶(Catalase，CAT)的活性顯著降低，分別為空白對照組的49.44％和72.57％。1mg/mL MBD可有效提高CAT酶活性約23.66％。運用Real-Time qPCR技術檢測Nrf2-ARE通路上Nrf2、HO-1、γ-GCS、GSTP1基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達變化，結(jié)果表明丙烯酰胺可誘導Nrf2、HO-1、γ-GCS和G

7、STP1基因上調(diào)表達，分別為空白對照組的2.96倍、4.46倍、4.17倍和1.30倍，以提高細胞抗氧化能力，抵抗氧化損傷;1mg/mL MBD、MBE處理組可有效清除AA誘導產(chǎn)生的ROS，緩解細胞的氧化應激損傷，因此Nrf2及下游系列基因表達量較AA處理組有所降低。
　　綜上所述，桑葚經(jīng)體外模擬胃腸道消化后，活性成分發(fā)生較大變化，仍具有良好的體外及細胞水平抗氧化能力，并可有效抑制AA誘導的肝臟細胞HepG2損傷，其作用機理可能與