白花丹參有效成分的抗炎活性評價及機制研究.pdf

1、白花丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge var.alba C.Y.Wu et H.W.Li，mss.)是唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)的白花變型，為山東地區(qū)所特有，主要分布于萊蕪、章丘、泰安等地，由于野生的白花丹參數(shù)量很少，主要通過人工栽培種植，因此被列為“泰山珍稀瀕危物種”之一。白花丹參與丹參的化學成分十分相似，主要為水溶性酚酸類及脂溶性的丹參酮類成分。在臨床上，白花丹參也常

2、代替丹參用來治療動脈粥樣硬化(AS)等心血管疾病;除此之外，白花丹參在民間用來治療血栓閉塞性脈管炎(TAO)具有獨特的療效，而這些心血管疾病與炎癥有著非常密切的關系。本課題組對白花丹參的化學成分研究已經(jīng)較為充分，但是對白花丹參有效成分的活性測定及機制研究較少，因此本文主要對白花丹參有效成分抗炎的活性進行了測定。
　　本文對從白花丹參分離得到的11種丹參酮類化合物，以丹參酮ⅡA為陽性對照，脂多糖(LPS)誘導的巨噬細胞THP-1為炎

3、癥模型，進行抗炎活性評價。采用MTT法測定THP-1細胞活力;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)及白介素-8(IL-8)蛋白表達水平;熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)法測定炎癥因子TNF-α，IL-1β及IL-8的mRNA表達水平。實驗結(jié)果表明所測定的11種丹參酮類化合物中，除化合物5之外，都能夠從蛋白與基因水平抑制LPS誘導的巨噬細胞THP-1中炎癥細胞因子TN

4、F-α，IL-1β及IL-8的表達，且在棚同濃度下，抑制作用要優(yōu)于陽性對照丹參酮ⅡA(TSⅡA)。其中，化合物9顯示出最強的抑制作用。其抗炎機制可能與抑制NF-κB信號通路有關，其更深入的機制還有待于進一步研究。
　　本文同樣對從白花丹參分離得到的9種酚酸類化合物，以丹酚酸B(Sal B)為陽性對照，LPS誘導的巨噬細胞THP-1為炎癥模型，進行抗炎活性評價并初步探討其作用機制。采用MTT法測定THP-1細胞活力;酶聯(lián)免疫吸附法(

5、ELISA)測定炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF-α)，白介素-1β(IL-1β)及白介素-6(IL-6)蛋白表達水平;熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)法測定炎癥因子TNF-α，IL-1β及IL-6的mRNA表達水平;Western Blot法檢測TLR4、p65、p-p65、IκBα、p-IκBα的蛋白表達水平。實驗結(jié)果顯示，所測9種酚酸類化合物均能夠從基因與蛋白水平顯著抑制LPS誘導的THP-1細胞炎癥因子IL-1β、IL

6、-6及TNF-α的過表達，其中化合物8抑制作用最明顯，此外，化合物8能夠顯著降低由LPS誘導的THP-1巨噬細胞中p-p65、p-IκBα及TLR4的高表達。結(jié)果證明9種酚酸類化合物具有抗炎活性，其抗炎作用是通過抑制TLR4/NF-κB信號通路實現(xiàn)的。
　　在民間，白花丹參用于治療血栓閉塞性脈管炎(TAO)已有百余年歷史，且療效獨特。本文采用大鼠股動脈注射月桂酸的方法建立TAO大鼠模型，通過觀察用藥前后模型大鼠的體征變化、病理切片

7、變化以及采用ELISA法檢測大鼠血清中血栓素B2(TXB2)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、6-酮-前列腺素F1α(6-K-PGF1α)的含量，研究丹參酮ⅡA對TAO大鼠模型的治療作用。結(jié)果顯示丹參酮ⅡA能明顯改善模型大鼠患肢病變情況，降低病變等級，減輕炎癥反應，減少血管內(nèi)血栓形成范圍，并能降低血清中TXB2、ET-1的含量及TXB2/6-K-PGF1α的比值，升高6-K-PGF1α的含量。表明丹參酮ⅡA對TAO具有較好的治療保護作用，其作用