人CD55抗原模擬表位的篩選及其對乳腺癌細胞的抑瘤作用研究.pdf

1、目的：利用噬菌體肽庫展示技術從Ph.D.12噬菌體肽庫中篩選能夠和人CD55單克隆抗體（CD55 McAb）特異性結合的短肽，從中找到CD55的抗原模擬表位，設計出與人腫瘤免疫逃逸蛋白CD55同源的的短肽，為腫瘤治療奠定理論基礎。
　　方法：以人CD55單克隆抗體為靶標，Ph.D.12肽庫通過4輪噬菌體篩選淘選出與CD55單克隆抗體特異性結合的短肽，計算每輪回收率。4輪篩選后，隨機挑選11個噬菌體單克隆和野生型噬菌體進行競爭結合，

2、計算其結合力。利用ELISA、競爭結合實驗鑒定篩選出結合力強的噬菌體單克隆，E.coliER2378宿主菌表達和純化噬菌體。將陽性噬菌體克隆交由公司測序，測序結果里找出出現(xiàn)頻率高的短肽序列，設計與人CD55單克隆抗體具有高親和性及特異性的短肽，并對其體外抗乳腺癌作用效果進行研究。CCK8實驗檢測CD55抗原模擬表位對乳腺癌細胞（MDA-MB-231和MCF-7細胞）增殖的影響。熒光顯微鏡驗證短肽在細胞中的攝入和分布。透射電鏡（Trans

3、mission electron microscopy, TEM）和流式細胞術檢測該短肽在乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞和MCF-7細胞凋亡中的影響。
　　結果：4輪篩選后，每輪噬菌體回收率都達到了較高數(shù)量級。競爭結合實驗結果顯示11個噬菌體單克隆和第3、4輪篩選后的噬菌體都與CD55單克隆抗體親和力都非常顯著。ELISA結果顯示有8個噬菌體單克隆和CD55單克隆抗體親和力顯著。根據(jù)測序結果得到兩條高表達短肽序列 HAHTPT

4、RGVMHA（簡稱 H肽）和QVNGLGERSQQM（簡稱Q肽）。CCK8實驗證明Q短肽序列對乳腺癌MDA-MB-231細胞和MCF-7細胞的毒性作用顯著且具有劑量依賴性，而H短肽較Q肽藥效較差，達到相同抑瘤率所需作用濃度較高。熒光顯微鏡觀察到Q短肽分布在細胞膜表面。透射電鏡和流式細胞術顯示Q短肽具有誘導MDA-MB-231和MCF-7細胞凋亡的作用。
　　結論：利用噬菌體隨機12肽庫成功得到兩條CD55單克隆抗體特異性結合的CD