增齡對大鼠下尿路α-,1-A與α-,1-D腎上腺素能受體亞型表達(dá)的影響.pdf

1、背景與研究目的：下尿路的主要作用是參與儲尿和排尿生理過程。在儲尿期，膀胱逼尿肌松弛，膀胱受容性舒張，尿液逐漸充盈膀胱；此時，膀胱頸及后尿道肌肉持續(xù)性收縮，尿道內(nèi)壓始終大于膀胱壓，防止儲尿期尿液不自主流出。在排尿期，膀胱頸和后尿道肌肉松弛，逼尿肌持續(xù)的收縮，在膀胱內(nèi)壓作用下，尿液排出。通過流行病學(xué)調(diào)查我們發(fā)現(xiàn)，下尿路疾病是普通人群常見病，它引起下尿路癥狀(lowerurinarytractsymptomsLUTS)。下尿路癥狀包括尿頻、尿

2、急、夜尿增多和尿失禁等儲尿期癥狀，以及尿線細(xì)、射程短、排尿中斷、排尿后滴瀝和尿潴留等排尿期癥狀，嚴(yán)重時明顯影響患者生活質(zhì)量。LUTS的發(fā)病似乎于性別無關(guān)，而與年齡有密切關(guān)系。40歲以上的人群中，發(fā)生LUTS的約占16％；在50-80老年男性人群中，前列腺增生引起膀胱出口梗阻(bladderoutletobstruction，BOO)發(fā)病率約占30％；同樣在中老年女性中，壓力性尿失禁(stressurinaryincontinence，S

3、UI)發(fā)病率在5-37％之間。隨著全球人口老齡化的出現(xiàn)，LUTS將成為未來社會普遍并高度關(guān)注的疾病癥候群。 下尿路疾病發(fā)生中，發(fā)揮作用的有許多因素，其中包括膽堿能受體(M受體)、非膽堿能非腎上腺素能受體(non-adrenergicnon-cholinergicreceptor，NANC受體)等等，但α1-腎上腺素能受體(α1-adrenergicreceptors，α1-ARs)的作用尤為重要。在人體下尿路組織內(nèi)，有豐富的交感

4、神經(jīng)分布，它們起自T10-L2脊髓中間外側(cè)柱的神經(jīng)元，經(jīng)下腹神經(jīng)、骶神經(jīng)叢傳遞至下尿路組織內(nèi)。交感神經(jīng)末梢興奮時，通過釋放去甲腎上腺素，作用于下尿路平滑肌產(chǎn)生收縮效應(yīng)，使得前列腺內(nèi)及后尿道的壓力增加，并因此引起下尿路癥狀。目前研究已發(fā)現(xiàn)動脈血管平滑肌中，α1-ARs表達(dá)量隨年齡增長而增加，其中以α1B-AR的增加幅度最大，提示α1B-AR影響血管收縮作用也隨年齡的增長而增加。也有報道指出老年大鼠α1-ARs介導(dǎo)的尿道收縮力較年輕大鼠明顯

5、降低。這些線索均提示衰老過程中下尿路α1-ARs表達(dá)可能發(fā)生變化，而目前國內(nèi)外相關(guān)報道甚少，且存在一定爭議。 本研究旨在檢測不同月齡段Wistar大鼠(2.5月齡、8月齡以及18月齡)膀胱、前列腺、前列腺以遠(yuǎn)0.5cm后尿道組織α1A和α1D受體mRNA、蛋白及組織水平表達(dá)。觀察大鼠衰老過程中，膀胱、前列腺、近段尿道α1A和α1D受體表達(dá)的變化。 材料及方法：通過手術(shù)獲取不同月齡段Wistar大鼠(2.5月齡、8月齡以及

6、18月齡)膀胱、前列腺、前列腺以遠(yuǎn)0.5cm后尿道。觀察組織重量變化，應(yīng)用RT-PCR、western印跡法以及免疫組化的方法，測定各組織α1A和α1D受體mRNA、蛋白及組織水平表達(dá)。觀察大鼠衰老過程中，膀胱、前列腺、近段尿道α1A和α1D受體表達(dá)的變化。 結(jié)果：①大鼠的體重隨鼠齡增加體重顯著增加(p＜0.01)；大鼠的膀胱、前列腺重量也隨月齡增加也有增加趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異；所取大鼠0.5cm后尿道存在一定主觀性，組間重量

7、比較意義不大。②RT-PCR結(jié)果提示：在大鼠下尿路，α1A受體mRNA的表達(dá)量高于α1D，而后尿道和前列腺的α1腎上腺素受體各亞型mRNA表達(dá)高于膀胱。年齡對腎上腺素受體表達(dá)的影響表現(xiàn)為大鼠α1A、α1D-ARmRNA的表達(dá)隨月齡增加逐漸下降，除8月齡大鼠膀胱α1D-ARmRNA表達(dá)較2.5月齡大鼠無統(tǒng)計學(xué)上顯著差異外，其他組間均存在顯著差異(p＜0.01)。③western印跡法結(jié)果提示：α1-ARs在大鼠下尿路各部位均以α1A-AR

8、蛋白表達(dá)為主。以2.5月齡大鼠為例，大鼠膀胱組織中α1A：α1D受體蛋白表達(dá)的比例約為71:29；前列腺組織中α1A：α1D-AR蛋白表達(dá)的比例約為69:31；后尿道組織中α1A：α1D-AR蛋白表達(dá)的比例約為64:36。而各月齡組間大鼠下尿路α1A、α1D-AR蛋白表達(dá)隨年齡增加而顯著下降(p＜0.01)。④免疫組化結(jié)果提示：在大鼠下尿路組織切片中陽性區(qū)域主要位于大鼠膀胱膀胱、尿道上皮、上皮下結(jié)締組織以及平滑肌肌組織內(nèi)和前列腺基質(zhì)，并

9、隨年齡增加明顯減少。⑤前列腺基質(zhì)內(nèi)平滑肌組織密度在老年大鼠較年輕大鼠少。 結(jié)論：α1A、α1D-AR在大鼠下尿路均有表達(dá)，并且主要表達(dá)在大鼠膀胱、尿道上皮、上皮下結(jié)締組織以及平滑肌組織和前列腺基質(zhì)。受體表達(dá)相對量隨著年齡的增加，大鼠膀胱、前列腺、后尿道組織α1A與α1D腎上腺素受體表達(dá)量在mRNA、蛋白、組織水平上明顯減少。這一發(fā)現(xiàn)從一方面解釋了老年大鼠α1-ARs介導(dǎo)的尿道收縮力較年輕大鼠明顯降低可能是因為α1-ARs表達(dá)下調(diào)

10、有關(guān)，目前α1腎上腺素受體在組織內(nèi)表達(dá)改變原因尚不清楚。試驗發(fā)現(xiàn)老年大鼠前列腺基質(zhì)內(nèi)平滑肌組織密度較青年大鼠減少，α1-ARs前列腺組織中主要表達(dá)在前列腺基質(zhì)平滑肌內(nèi)，所以我們認(rèn)為衰老過程中基質(zhì)平滑肌的密度減少可能是導(dǎo)致前列腺組織內(nèi)α1-ARs表達(dá)下調(diào)的原因之一。從某種角度講，這也解釋了BPH患者α1-ARs表達(dá)上調(diào)的原因，因為BPH患者主要以前列腺基質(zhì)增生明顯，基質(zhì)平滑肌明顯增加。另外通過本次試驗，我們?yōu)檫M一步研究老年人下尿路癥狀的發(fā)