信號(hào)肽對(duì)膜蛋白定位的影響.pdf

1、膜蛋白表達(dá)和定位一直是國(guó)內(nèi)外關(guān)注的難題，本文試圖從信號(hào)肽這方面著手探討此問(wèn)題。本文研究的膜蛋白是存在于嗜堿菌膜上的一種小分子膜蛋白MrpF，屬于嗜堿菌的Mrp Na+/H+反向載體膜蛋白系統(tǒng)的一個(gè)成員。關(guān)于信號(hào)肽的研究始于20世紀(jì)60年代，信號(hào)肽可引導(dǎo)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白轉(zhuǎn)移至周質(zhì)空間或胞外。信號(hào)肽包括三個(gè)區(qū)，即中間的疏水核心區(qū).(h區(qū))，C端的極性區(qū)(c區(qū))和N端的強(qiáng)極性區(qū)(n區(qū))。大腸桿菌中，由信號(hào)肽引導(dǎo)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)主要有兩種方式：Sec

2、途徑和Tat途徑，也有的蛋白質(zhì)可以利用這兩種方式轉(zhuǎn)運(yùn)。本文選取了Sec途徑中的MalE和PhoA信號(hào)肽，Tat途徑中的TorA信號(hào)肽，雙途徑中的FhuD信號(hào)肽，分別稱為S1、S2、S3和S4，用于本課題研究。
　　 本文從表達(dá)載體構(gòu)建、融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和帶有PhoA標(biāo)簽的重組蛋白的酶活測(cè)定等方面展開研究。本文成功構(gòu)建15種重組質(zhì)粒。蛋白誘導(dǎo)表達(dá)顯示，帶有PhoA標(biāo)簽的重組蛋白中，S2和S3對(duì)膜蛋白MrpF定位的超表達(dá)有影響；帶

3、有MBP標(biāo)簽的重組蛋白中，S1對(duì)膜蛋白MrpF定位的超表達(dá)有影響；不帶標(biāo)簽的重組蛋白中，S1和S3對(duì)不帶標(biāo)簽的膜蛋白MrpF定位的超表達(dá)均有促進(jìn)作用。全蛋白酶活檢測(cè)顯示，重組蛋白BL21/pCLE20、BL21/DCLE18和BL21/pCLE10的活性按倍數(shù)增加，重組蛋白BL21/pCLE12和BL21/pCLE16無(wú)活性。膜蛋白酶活檢測(cè)顯示，重組蛋白BL21/DCLE12、BL21/pCLE16和BL21/pCLE20活性很低。BL