絲裂霉素對HUVEC遷移能力的影響并機(jī)制初探.pdf

1、目的：觀察絲裂霉素對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)作用的選擇性和細(xì)胞遷移能力的影響及機(jī)制研究。
　　 方法：
　　 1．絲裂霉素對HUVEC作用的選擇性。以人肝癌SMMC-7721細(xì)胞(7721)為對照，將不同劑量絲裂霉素與細(xì)胞共培養(yǎng)，MTT法測定細(xì)胞存活率。以半數(shù)抑制濃度(IC50)為作用選擇性指標(biāo)，衡量絲裂霉素對HUVEC作用的選擇性。
　　 2．絲裂霉素對HUVEC凋亡的影響。分別以不同劑量的絲裂霉素與

2、細(xì)胞共培養(yǎng)48小時后，固定。采用HE染色觀察藥物對細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響;吖啶橙/溴化乙錠(AO:EB)雙熒光染色法觀察藥物對HUVEC凋亡的影響。
　　 3．絲裂霉素對HUVEC遷移能力的影響。采用Transwell小室(BoydenChamber Transwell)法將細(xì)胞與不同劑量藥物共培養(yǎng)8小時，固定、染色，觀察細(xì)胞移行能力。
　　 4．絲裂霉素對HUVEC水通道蛋白-1(aquaporin1，AQP1)表達(dá)的影響。

3、將細(xì)胞與不同劑量的絲裂霉素共培養(yǎng)48小時后，分別采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法和Western-Blot法測定藥物對HUVEC AQP1表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1．HUVEC與藥物共培養(yǎng)24、48、72小時后存活率濃度依賴性地降低(P＜0.01)。不同培養(yǎng)時間的IC50(34.74μg/ml、1.79μg/ml、2.03μg/ml)明顯低于7721對照細(xì)胞(379.05Ltg/ml、11.12μg/ml、5.21μg/m

4、l，P＜0.01)。
　　 2．HE染色顯示不同劑量的絲裂霉素處理HUVEC出現(xiàn)程度不等的體積縮小、細(xì)胞核固縮、深染等細(xì)胞損傷形態(tài)學(xué)改變。AO:EB雙熒光染色顯示，應(yīng)用不同劑量的絲裂霉素處理48小時，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(24.6％、47.4%、89.1%)較空白對照組(7.5%)增加顯著(P＜0.01)，各劑量組間亦有明顯差異，顯示劑量相關(guān)性(P＜0.01)。
　　 3．Boyden Chamber Transwell法研

5、究結(jié)果顯示，在未對細(xì)胞存活率產(chǎn)生影響的基礎(chǔ)上，不同劑量(0.09μg/ml、0.03μg/ml、0.01μg/ml)絲裂霉素可降低HUVEC遷移率(75.1%、49.5%、18.4%)，與正常對照組比較差異顯著(P＜0.01)。
　　 4.免疫細(xì)胞化學(xué)法及Western Blot分析法研究均顯示絲裂霉素可劑量依賴性降低HUVEC AQP1的表達(dá)(陽性細(xì)胞表達(dá)率68.18%、54.21%、49.11%；相對蛋白表達(dá)3.04、2.6

6、8、1.25)與對照組（陽性細(xì)胞表達(dá)率89.76%;相對蛋白表達(dá)4.32）比較差異顯著(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1．絲裂霉素對體外培養(yǎng)的HUVEC存活率有明顯的、濃度依賴性的抑制作用，與對照細(xì)胞7721相比選擇性高。
　　 2．絲裂霉素抑制HUVEC存活率與促進(jìn)其凋亡有關(guān)。
　　 3．在低劑量不影響HUVEC存活率的情況下絲裂霉素抑制細(xì)胞的移行。
　　 4．絲裂霉素促進(jìn)細(xì)胞凋亡及抗遷