MCP-1-CCR2軸參與骨髓間充質干細胞歸巢治療心肌梗死的實驗研究.pdf

1、目的：骨髓間充質干細胞歸巢到心肌梗死部位的確切機制尚未完全闡明。本實驗通過研究單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)及其受體CCR2軸在參與骨髓間充質干細胞歸巢到心肌梗死部位中的作用，以探討骨髓間充質干細胞歸巢的可能機制及提高治療心肌梗死的療效。
　　 方法：1、體外趨化實驗體外培養(yǎng)的第三代MSCs分為未處理的MSCs組，低氧預處理的MSCs組和兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs組。分別將不同處理組的MSCs置于Transwell板

2、的上層，板的下方予以趨化因子MCP-1(200ng/ml)，計算不同處理組MSCs的趨化能力2、在心梗后不同時間點(1，3，7，14，28d)不同區(qū)域(梗死中心區(qū)，梗死邊緣區(qū)，正常心肌區(qū))，行免疫組化檢測MCP-1的含量。3、實驗動物分為四組：A為對照組，心梗后一周經冠脈僅注射DMEM；B組為心梗后一周經冠脈注射未經處理的MSCs；C組為心梗后一周經冠脈注射經過低氧預處理的MSCs；D組為心梗后一周經冠脈注射經兔抗CCR2中和抗體處理的

3、MSCs。4、應用明膠海綿小栓子栓塞豬冠狀動脈左前降支第二對角支遠端，建立心梗模型。于心梗后一周，將不同處理組的MSCs(1×107/5 mL)經心導管注射到LAD栓塞處遠端。各組以Powerlab+Millar壓力導管、心超檢測分析心梗前、心梗后、干細胞移植后四周心功能狀況。干細胞移植后四周獲取動物心臟，病理切片HE染色觀察心肌組織學變化，Ⅷ因子免疫組化染色計數新生血管密度，以及組織中經Brdu標記的MSCs歸巢數量。
　　

4、結果：1、MCP-1對經過低氧預處理的MSCs遷移作用最強(P<0.05)，對未經處理的MSCs遷移作用稍弱但有明顯的遷移作用(P<0.05)，而對經過兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs遷移作用明顯減弱，結果有顯著差異(P<0.05)。2、豬心肌梗死區(qū)域中，MCP-1的含量在梗死中心區(qū)第1d開始升高，第3d達到頂峰，至兩周后降至正常水平，而梗死邊緣區(qū)域第1d開始升高，一周后到達頂峰，以后逐漸下降，四周后恢復至正常水平。3、梗死后一周行不

5、同類型MSCs移植。在移植后四周發(fā)現C經低氧預處理的MSCs組在心功能改善和Ⅶ因子新生血管密度及Brdu標記的干細胞歸巢量比較均優(yōu)于其他各組(P<0.05)。D經兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs組又較A組改善明顯(P<0.05)。
　　 結論：1、MCP-1/CCR2軸參與了骨髓間充質干細胞歸巢。2、MCP-1對經過低氧預處理的MSCs趨化能力最強，MSCs表面表達CCR2的受體增加可能為其機制之一。3、心肌梗死區(qū)表達MCP-