黑木相思離體培養(yǎng)與再生系統(tǒng)的建立.pdf

1、黑木相思(Acaciamelanoxylon)，是近年來我國南方引進(jìn)的主要用材樹種之一，它具有適應(yīng)性強(qiáng)、速生豐產(chǎn)、耐寒冷、用途廣泛等特點(diǎn)。本試驗(yàn)以4個(gè)不同種源黑木相思種子為基本材料，從無菌體系的建立、繼代培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)、煉苗移栽等各個(gè)環(huán)節(jié)展開研究；以種子無菌萌發(fā)下胚軸為誘導(dǎo)愈傷組織的起始材料，建立起4個(gè)不同種源黑木相思愈傷組織體系，并從愈傷組織分化出苗；以長期繼代黑木相思愈傷組織為基本材料，建立了黑木相思細(xì)胞懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系。主要研究結(jié)果

2、如下： 1.黑木相思無菌體系的建立。比較幾種不同的黑木相思種子前處理方法，采用1.84g/mL濃硫酸處理10min，種子發(fā)芽率達(dá)到86.7％；然后采用常規(guī)消毒0.1％升汞處理15min，可以使污染率控制在6％；接種到MS+1g/L活性炭培養(yǎng)基中，生長狀況良好。 2.黑木相思芽苗增殖培養(yǎng)。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考慮不同植物生長素對(duì)黑木相思芽苗增殖的影響，篩選出一代培養(yǎng)基為附加1.0mg/L6-BA、1.0mg/LKT和0.4m

3、g/LIBA的MS培養(yǎng)基，30d后增殖數(shù)可以達(dá)到3.15；二次繼代時(shí)采用MS+0.4mg/LKT+0.4mg/LIBA+20g/L蔗糖；壯苗培養(yǎng)基選擇MS+0.2mg/LIBA+15g/L蔗糖。 3.黑木相思試管苗生根和移栽。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考慮不同種類和濃度生長素對(duì)黑木相思無菌苗生根的影響，篩選出生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS+0.4mg/LIBA+0.2mg/LIAA+15g/L蔗糖；移栽基質(zhì)選擇黃心土∶泥炭土=2∶1，移栽

4、后一個(gè)星期內(nèi)是移栽成活的關(guān)鍵時(shí)期，注意保持葉片水分平衡，移栽成活率可以達(dá)到80％以上。 4.黑木相思愈傷組織體系的建立。以4個(gè)種源黑木相思種子無菌萌發(fā)下胚軸為誘導(dǎo)愈傷組織基本材料，篩選出誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基為1.0mg/L2，4-D2.0mg/LBA的MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率為95％；愈傷組織繼代培養(yǎng)基選擇0.5mg/L2，4-D、2.0mg/LBA、300mg/LLH的MS培養(yǎng)基與2.0mg/LBA、1.0mg/LKT、1.0mg/

5、LNAA、300mg/LLH的B5培養(yǎng)基交替培養(yǎng)。 5.黑木相思愈傷組織培養(yǎng)再生植株。以長期繼代黑木相思愈傷組織為基本材料，在光照條件下，在含有1.0mg/LBA、1.0mg/LKT、0.5mg/LNAA和300mg/LLH的MS培養(yǎng)基中，可以使愈傷組織的分化率達(dá)到30％；分化愈傷組織在1.0mg/LBA、0.5mg/LNAA和0.1mg/LGA的培養(yǎng)基上，再生率44％。 6.黑木相思懸浮細(xì)胞系的建立?？紤]培養(yǎng)起始接種量