黃芪糖蛋白的分離純化、結(jié)構(gòu)分析及免疫活性的研究.pdf

1、糖蛋白是一類由糖類與多肽或蛋白質(zhì)以共價鍵相連接而形成的結(jié)合蛋白。研究表明，糖蛋白具有調(diào)節(jié)免疫、降低血糖、抑制腫瘤、抗氧化、防衰老、調(diào)血脂等作用。黃芪糖蛋白的研究對開發(fā)新藥具有較大的應(yīng)用價值，對提高人們的健康水平具有廣闊的應(yīng)用前景。本論文以黃芪為原料，對黃芪糖蛋白進行了分離、純化，并系統(tǒng)的研究了黃芪糖蛋白的理化性質(zhì)、組成、結(jié)構(gòu)及免疫調(diào)節(jié)作用。為黃芪的開發(fā)利用提供理論指導和工藝參數(shù)。
　　 本文通過水浸提法，采用單因素試驗確定了黃芪

2、糖蛋白的最佳提取條件;研究了DEAE-FF柱層析對黃芪糖蛋白的純化條件，采用Sephadex G-50柱層析對黃芪糖蛋白進一步純化;用BSA法對黃芪糖蛋白進行含量測定，SDS-PAGE法進行純度鑒定；研究了黃芪糖蛋白的理化性質(zhì)，對黃芪糖蛋白中氨基酸及單糖組成進行了分析;分離提取小鼠脾淋巴細胞和腹腔巨噬細胞，以MTT法檢測單一組分HQGP-1對這些免疫細胞轉(zhuǎn)化的影響;通過動物實驗，研究了HQGP-1對小鼠體重及免疫器官指數(shù)，血清溶血素抗體

3、生成及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響。主要研究結(jié)論如下:
　　 1).最佳提取條件為提取緩沖液為TrisCl(25mM pH8.0)-NaCl(50mM)，浸提溫度為55℃，浸提時間為1h，液料比1∶10，提取次數(shù)為1次。
　　 2).黃芪糖蛋白純化時采用BufferA和Buffer B作為DEAE-FF弱陰離子交換層析柱的洗脫劑梯度洗脫，初步分離出糖蛋白后，再用BufferA作為SephadexG-50的洗脫劑進行第二步純化，分

4、離出HQGP-1。用SDS-PAGE法鑒定其為電泳純;MALDITOF/TOF型質(zhì)譜測定其分子量為16797Da;對HQGP-1進行了紅外光譜掃描，其特征吸收峰再次表明該組分為一種糖蛋白;對HQGP-1進行紫外光譜掃描，確定其糖肽鍵類型為O-糖苷鍵;測定了HQGP-1的單糖組成，結(jié)果表明HQGP-1的單糖組成主要有葡萄糖和阿拉伯糖;氨基酸自動分析儀測定了HQGP-1的氨基酸組成，共含有16種氨基酸，其中谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、懶氨酸含

5、量最高;氨基酸序列分析結(jié)果為ESGINLQGDATL，為抗真菌凝集素AMML。
　　 3).HQGP-1對小鼠脾淋巴細胞，腹腔巨噬細胞，以及ConA、LPS誘導的脾淋巴細胞和腹腔巨噬細胞的轉(zhuǎn)化都有抑制作用，最大抑制濃度為10μg/ml。
　　 4).體內(nèi)試驗，低、高劑量和對照組之間，體重沒有統(tǒng)計學差異，故可認為低、高劑量組的該項試驗結(jié)果為陽性，給藥不會造成小鼠的毒性反應(yīng);低劑量胸腺指數(shù)與對照組存在顯著差異，脾指數(shù)差異不顯