基于代謝組學(xué)的冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘作用機(jī)制及臨床療效研究.pdf

1、冬病夏治是中醫(yī)防治疾病的特色療法，其理論根源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》。冬病夏治理論體現(xiàn)了中醫(yī)“天人相應(yīng)”的整體觀、“不治已病治未病”的疾病預(yù)防觀、“春夏養(yǎng)陽(yáng)，秋冬養(yǎng)陰”的陰陽(yáng)平衡觀、經(jīng)絡(luò)養(yǎng)生觀及五行生克制化，在該理論指導(dǎo)下衍生了多種具體治療方法，其中“三伏貼”是最能體現(xiàn)冬病夏治理念的療法。冬病夏治穴位貼敷療法被應(yīng)用于多種疾病的防治，尤其是對(duì)肺系疾病的預(yù)防和治療上取得了良好療效。
　　支氣管哮喘(bronchial asthma)簡(jiǎn)稱哮喘，是

2、由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病，是一種以氣道高反應(yīng)性和可逆性氣道阻塞為特征的免疫變態(tài)反應(yīng)性疾病。目前全球約有3億哮喘患者，其中每年約有1500萬(wàn)人因該病喪失勞動(dòng)能力，中國(guó)已有2000萬(wàn)的哮喘患者，且哮喘的患病率呈持續(xù)升高的趨勢(shì)，給患者和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)，因此哮喘被認(rèn)為是現(xiàn)階段對(duì)公眾健康具有重大威脅的慢性肺部疾病。西醫(yī)在哮喘急性發(fā)作期的治療上有明顯優(yōu)勢(shì)，但對(duì)于非急性發(fā)作期的防治尚不令人滿意。冬病夏治穴位貼敷療法以其療效顯

3、著，治療費(fèi)用低，無(wú)明顯不良反應(yīng)，且能有效防止其復(fù)發(fā)等優(yōu)勢(shì)，被廣大哮喘患者所接受。但是其作用機(jī)制不明確且相關(guān)研究較少，難以從整體層面闡述其作用機(jī)理，對(duì)其進(jìn)一步深入的探討研究有賴于適合闡釋中醫(yī)理論的技術(shù)平臺(tái)，而代謝組學(xué)技術(shù)則提供了很好的切入點(diǎn)。
　　代謝組學(xué)(metabolomics)是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)之后興起的系統(tǒng)生物學(xué)的新分支。它通過(guò)考察生物體系受刺激或擾動(dòng)前后代謝產(chǎn)物圖譜及其動(dòng)態(tài)變化來(lái)研究生物體系的代謝網(wǎng)絡(luò)。它跳

4、過(guò)了生命體內(nèi)復(fù)雜的調(diào)控過(guò)程，通過(guò)對(duì)代謝物的分析給出最終的、整體的結(jié)果，這種在整體上展示生物體內(nèi)在的動(dòng)態(tài)變化狀況的技術(shù)，避免了以往采用單一或少數(shù)幾個(gè)指標(biāo)研究某種生理和病理變化的弊端，故而在方法學(xué)上具有融整體、動(dòng)態(tài)、綜合、分析于一體的特點(diǎn)，符合中醫(yī)學(xué)整體恒動(dòng)觀念，是一項(xiàng)比較適合中醫(yī)學(xué)研究的技術(shù)手段。
　　課題組借助代謝組學(xué)技術(shù)，通過(guò)對(duì)肺氣虛型哮喘患者經(jīng)冬病夏治穴位貼敷干預(yù)前后及干預(yù)后冬季代謝物的分析，確定肺氣虛型哮喘患者的“代謝組學(xué)特

5、征”的小分子生物標(biāo)志物及冬病夏治穴位貼敷發(fā)揮療效的內(nèi)源性物質(zhì)基礎(chǔ)，以小分子生物標(biāo)志物為線索探討冬病夏治穴位貼敷療法防治哮喘的作用機(jī)制。并討論冬病夏治穴位貼敷對(duì)哮喘患者免疫、炎癥、神經(jīng)調(diào)控機(jī)制的影響，以期從較為“宏觀”層面探討作用機(jī)制的同時(shí)反證其臨床療效。通過(guò)上述研究將為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)、提高臨床療效奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　本篇論文主要包括理論、臨床和實(shí)驗(yàn)三大部分。
　　第一部分冬病夏治理論研究概述
　　目的：研究冬病夏治理論

6、內(nèi)涵并總結(jié)其臨床應(yīng)用及治療哮喘的作用機(jī)理，探討利用新技術(shù)平臺(tái)對(duì)冬病夏治防治哮喘的機(jī)制進(jìn)行深入、全面探索的可行性。
　　方法：根據(jù)古今文獻(xiàn)記載，從冬病夏治理論淵源、防治肺系疾病的臨床應(yīng)用、防治哮喘的作用機(jī)制研究及新研究方法等角度進(jìn)行了詳細(xì)論述。
　　結(jié)果：冬病夏治有豐富的理論內(nèi)涵，其防治疾病的方法被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐，并取得良好療效。但發(fā)揮療效的作用機(jī)理尚不明確，需要適合闡述中醫(yī)理論的研究方法進(jìn)一步深入探討。
　　第二部

7、分冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘臨床療效觀察
　　目的：觀察冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的臨床療效。
　　方法：采用自身配對(duì)比較方法，選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患者50例，給予冬病夏治穴位貼敷治療。詳細(xì)記錄患者治療前后癥狀積分、發(fā)作次數(shù)，并對(duì)其生活質(zhì)量進(jìn)行評(píng)分比較。
　　結(jié)果：與治療前比較，治療后哮喘患者臨床癥狀評(píng)分均明顯降低、發(fā)病次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),總有效率為86％；治療后哮喘患者哮喘癥狀、活動(dòng)

8、受限、心理功能狀況及對(duì)自我健康的關(guān)心等四個(gè)維度評(píng)分均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)刺激原的反應(yīng)評(píng)分雖有所提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　第三部分冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
　　實(shí)驗(yàn)一肺氣虛型支氣管哮喘患者血漿代謝組學(xué)特征研究
　　目的：應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)研究肺氣虛型支氣管哮喘患者的血漿代謝組學(xué)特征，尋找肺氣虛型哮喘的潛在生物標(biāo)志物。
　　方法：選擇符合診

9、斷標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患者50例，設(shè)為疾病組；并選擇50例健康志愿者，設(shè)為正常組。分別對(duì)正常組及疾病組采集血液。采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)檢測(cè)兩組的血漿代謝物，利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較兩組血漿代謝組學(xué)原始圖譜和數(shù)據(jù)，找尋潛在生物標(biāo)志物。
　　結(jié)果：疾病組的代謝譜與正常組明顯不同，初步推測(cè)組胺、膽堿、半胱氨酸、同型半胱氨酸、鳥氨酸、谷氨酸、鋅、腎上腺素、

10、高肌肽等9種物質(zhì)為肺氣虛型支氣管哮喘的潛在代謝標(biāo)志物。其中組胺、膽堿、鳥氨酸、同型半胱氨酸在疾病組呈上升趨勢(shì)，其他5種物質(zhì)均呈下降趨勢(shì)。
　　實(shí)驗(yàn)二基于代謝組學(xué)探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制研究
　　目的：應(yīng)用代謝組學(xué)探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制，找尋其發(fā)揮療效的潛在生物標(biāo)志物。
　　方法：選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患者50例，給予冬病夏治穴位貼敷治療。分別于治療前、治療后及治療后冬季采集血液

11、。采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)檢測(cè)三次血漿代謝物，利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較三次血漿代謝組學(xué)原始圖譜和數(shù)據(jù)，找尋潛在生物標(biāo)志物。
　　結(jié)果：(1)哮喘患者治療后的代謝譜與治療前有明顯不同，初步推測(cè)組胺、膽堿、半胱氨酸、同型半胱氨酸、鋅、鳥氨酸、腺嘌呤、乙酰乙酸、多巴胺等9種物質(zhì)為區(qū)別哮喘患者治療前后差異性潛在代謝標(biāo)志物。其中組胺、膽堿、鳥氨酸、同

12、型半胱氨酸、乙酰乙酸、腺嘌呤在治療后呈下降趨勢(shì)，其他3種物質(zhì)均呈上升趨勢(shì)。(2)哮喘患者治療后冬季的代謝譜與治療前有明顯不同，初步推測(cè)出膽堿、半胱氨酸、鋅、鳥氨酸、腎上腺素、高肌肽、同型半胱氨酸、脫氫抗壞血酸、乙酰膽堿等9種物質(zhì)為區(qū)別哮喘患者治療前與治療后冬季差異性潛在代謝標(biāo)志物。其中膽堿、鳥氨酸、同型半胱氨酸、乙酰膽堿在治療后冬季呈下降趨勢(shì)，其他5種物質(zhì)均呈上升趨勢(shì)。
　　實(shí)驗(yàn)三冬病夏治穴位貼敷對(duì)支氣管哮喘患者免疫、炎癥及神經(jīng)調(diào)

13、控機(jī)制的影響
　　目的：從免疫、炎癥及神經(jīng)調(diào)控機(jī)制探討冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)理。
　　方法：選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患者50例，設(shè)為疾病組，給予冬病夏治穴位貼敷治療；并選擇50例健康志愿者，設(shè)為正常組。檢測(cè)正常組及疾病組哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清免疫球蛋白A、G、E(IgA、IgG、IgE)、干擾素-γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子-α(TN

14、F-α)、血漿P物質(zhì)(SP)及血管活性腸肽(VIP)的含量，比較正常組、疾病組治療前、治療后及治療后冬季檢測(cè)指標(biāo)的差異。
　　結(jié)果：(1)免疫球蛋白：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清IgE含量均明顯升高，血清IgA、IgG含量均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血清IgE含量均明顯降低，血清IgA、IgG含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)細(xì)胞

15、因子：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血清IFN-γ、IL-10含量均明顯降低，血清TNF-α含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而 IL-4含量在治療前和治療后冬季升高(P<0.05)，治療后與正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血清 IFN-γ、IL-10含量明顯升高，血清 IL-4含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而 TNF-α含量雖有降低，但

16、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)神經(jīng)遞質(zhì)：與正常組比較，哮喘患者治療前、治療后及治療后冬季血漿SP含量明顯升高，VIP含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與治療前比較，哮喘患者治療后及治療后冬季血漿SP含量明顯降低，VIP含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1目前冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制研究較少，且集中于夏季治療時(shí)段某一功能的相關(guān)個(gè)別指標(biāo)，難以全面而整體地闡釋

17、其機(jī)理。代謝組學(xué)技術(shù)所具備的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)有利于進(jìn)一步深入探討冬病夏治穴位貼敷防治哮喘的作用機(jī)制，為全面而整體地研究其作用機(jī)理提供了可能。
　　2冬病夏治穴位貼敷療法不僅能夠改善哮喘患者的臨床癥狀、減少發(fā)作次數(shù)，而且能夠提高患者生存質(zhì)量，療效確切，為作用機(jī)制研究提供了堅(jiān)實(shí)的臨床基礎(chǔ)。
　　3肺氣虛型支氣管哮喘患者內(nèi)源性物質(zhì)變化可能與膽堿代謝、氨基酸代謝及能量代謝有關(guān)，還伴有激素、微量元素及細(xì)胞因子的異常變化；同時(shí)還可能存在抗氧化

18、應(yīng)激及抗凋亡機(jī)制異常、維生素類的缺乏和氨轉(zhuǎn)運(yùn)的異常。
　　4冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)氨基酸代謝及能量代謝，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體抗氧化及抗凋亡能力，調(diào)控細(xì)胞信號(hào)及神經(jīng)遞質(zhì)，改善氨轉(zhuǎn)運(yùn)，調(diào)節(jié)激素水平有關(guān)。
　　5冬病夏治穴位貼敷防治支氣管哮喘的作用機(jī)制中夏季治療期以調(diào)控細(xì)胞信號(hào)和抑制變態(tài)反應(yīng)為特有機(jī)制；冬季則以調(diào)節(jié)激素水平和增強(qiáng)抗氧化能力為特有機(jī)制。
　　6冬病夏治穴位貼敷可能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞因子的