門靜脈動脈化及腔門靜脈轉(zhuǎn)位術(shù)對大鼠肝切除后再生的實驗研究.pdf

1、【目的】
　　 1、建立新的、可行的、重復(fù)性好、穩(wěn)定的大鼠門靜脈動脈化及腔門靜脈轉(zhuǎn)位模型，為研究門靜脈不同灌流方式對肝臟再生的影響提供動物模型。
　　 2、探討門靜脈動脈化及腔門靜脈轉(zhuǎn)位術(shù)對大鼠40％肝切除后肝臟再生的影響并評價門靜脈兩種灌流方式對肝臟的再生作用。
　　 【方法】
　　 1、建立大鼠門靜脈動脈化動物模型：以袖套法為基礎(chǔ)，采用同種異體血管套入式縫合及袖套的方法建立大鼠門靜脈動脈化模型40例。

2、切除左腎，將左腎動脈與門靜脈殘端通過同種異體血管連接，左腎靜脈借助袖套與腸系膜上靜脈連接。術(shù)后觀察外周血肝功能變化、肝臟病理改變、體重變化、術(shù)后生存率及MRI血管成像。
　　 2、建立大鼠腔門靜脈轉(zhuǎn)位動物模型：以袖套法為基礎(chǔ)建立大鼠腔門靜脈轉(zhuǎn)位動物模型40例，在右腎靜脈水平離斷下腔靜脈，在門靜脈第1屬支處離斷門靜脈，左腎靜脈借袖套與門靜脈連接，下腔靜脈借雙頭袖套與腸系膜上靜脈連接。術(shù)后觀察外周血肝功能變化、肝臟病理改變、體重變化

3、、術(shù)后生存率及MRI血管成像。
　　 3、建立40％肝切除后的大鼠門靜脈動脈化及腔門靜脈轉(zhuǎn)位模型：在上述兩種模型的基礎(chǔ)上切除大鼠40％肝臟（左葉+乳頭葉）。取100只SD大鼠，隨機取90只大鼠，隨機分為三組，每組30只。A組：門靜脈動脈化聯(lián)合40％肝切除組，B組：腔門靜脈轉(zhuǎn)位聯(lián)合40％肝切除組，C組：對照組：行左腎及40％肝切除組。另取10只作40％肝切除后預(yù)計的剩余肝平均重量。在術(shù)后第3、7、14天，共3個時間點，每個時間點隨

4、機取10只作以下指標(biāo)觀察：門靜脈壓力、肝功能測定、殘肝再生功能的評估、肝臟HE染色、Ki-67、TUNEL免疫組化染色、電鏡觀察。
　　 4、統(tǒng)計學(xué)處理：計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料經(jīng)正態(tài)性檢驗,符合正態(tài)分布計量資料采用t檢驗或單因素方差分析,兩兩比較用LSD程序進行，以P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 【結(jié)果】
　　 1、大鼠門靜脈動脈化模型

5、及腔門靜脈轉(zhuǎn)位模型的評價
　　 兩種模型均造模成功。門靜脈動脈化模型組造模成功率97.5％（39/40），腔門靜脈轉(zhuǎn)位模型組造模成功率95％（38/40），造模成功的大鼠均存活至術(shù)后2月。術(shù)后1個月，兩模型組、假手術(shù)組白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和膽堿酯酶、體重兩兩比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)后2個月門靜脈動脈化模型組門靜脈通暢率為94.9％（37/39），腔門靜脈轉(zhuǎn)位組門靜脈通暢率為84.2％（32/38）。兩模型

6、組磁共振血管成像及病理結(jié)果均未見明顯異常。
　　 2、門靜脈動脈化及腔門靜脈轉(zhuǎn)位對大鼠40％肝切除后再生的影響
　　 2.1一般情況：A組和C組手術(shù)成功率均100％，B組手術(shù)成功率96.7％。A組門靜脈壓力較對照組明顯升高，B組門靜脈壓力在術(shù)后14天明顯降低。肝功能A組術(shù)后3天ALT明顯降低，B組術(shù)后14天ALT明顯升高，三組大鼠ALB、ALP比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。A組殘肝再生率在術(shù)后3、7天均明顯高于對照組，B組均明顯低

7、于對照組。
　　 2.2 病理：HE染色A組肝竇擴張，小葉間靜脈擴張明顯；B組肝細(xì)胞有較多脂肪變性及細(xì)胞凋亡，匯管區(qū)有較多淋巴細(xì)胞浸潤；C組基本正常。Ki-67標(biāo)記指數(shù)A組術(shù)后3天明顯高于對照組，B組在術(shù)后7天明顯低于對照組，但在術(shù)后14天高于對照組。肝細(xì)胞凋亡指數(shù)B組在術(shù)后3、7天均高于對照組。
　　 2.3 透射電鏡觀察：A組可見數(shù)量較多的線粒體及雙核肝細(xì)胞。B組細(xì)胞核染色質(zhì)稍濃縮，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有輕度脫顆粒現(xiàn)象，可見凋

8、亡細(xì)胞。C組基本正常。
　　 【結(jié)論】
　　 1、利用同種異體的動脈血管材料行袖套法建立大鼠門靜脈動脈化模型，血管通暢率高，是一個可行、穩(wěn)定、操作簡便、可重復(fù)性強的模型。
　　 2、利用同種異體的上腔靜脈做成的雙頭袖套行袖套法建立大鼠腔門靜脈轉(zhuǎn)位模型，手術(shù)時間短、成功率高、穩(wěn)定可靠，是一個可行、操作簡便的模型。
　　 3、在大鼠門靜脈動脈化聯(lián)合40％肝切除術(shù)后的實驗中，發(fā)現(xiàn)早期ALT較對照組降低，而膽堿酯

9、酶、殘肝再生率、Ki-67標(biāo)記指數(shù)均較對照組明顯升高，電鏡檢查示線粒體增多，表明門靜脈動脈化能增強肝切除術(shù)后早期殘余肝臟的能量代謝及再生能力，從而有助于提高存活率。
　　 4、在大鼠腔門靜脈轉(zhuǎn)位聯(lián)合40％肝切除術(shù)的實驗中，發(fā)現(xiàn)早期肝功能指標(biāo)與對照組無明顯差異，而殘肝再生率、Ki-67標(biāo)記指數(shù)均低于門靜脈動脈化組，肝細(xì)胞凋亡指數(shù)則高于門靜脈動脈化組，表明腔門靜脈轉(zhuǎn)位在行肝切除術(shù)后早期對肝臟的能量代謝及再生能力、手術(shù)耐受力均比門靜脈