新型血清髓過氧化物酶電化學(xué)免疫傳感器的研究.pdf

1、目的：
　　血清髓過氧化物酶(MPO)是由吞噬細(xì)胞受激活以后分泌產(chǎn)生的一種血紅素蛋白，是動(dòng)脈粥樣硬化過程多個(gè)階段的潛在參與者。人類生物學(xué)和基因組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，血清MPO與心血管疾病密切相關(guān)，是心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)強(qiáng)有力的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。與cTnI，Myo和CK-MB不同的是，MPO能預(yù)測(cè)早期心肌梗死及在隨后的1～6個(gè)月內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重心血管疾病的危險(xiǎn)性。因此，MPO的檢測(cè)在ACS的早期臨床診斷中具有重要的意義。電化學(xué)免疫傳感器把電化學(xué)方法的靈敏性

2、和免疫反應(yīng)的特異性有機(jī)的結(jié)合起來，通過換能器將生物信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，從而廣泛的應(yīng)用于臨床診斷領(lǐng)域。為了彌補(bǔ)現(xiàn)有MPO檢測(cè)方法的不足，旨在建立一種新型電化學(xué)免疫傳感器用于MPO的快速、靈敏檢測(cè)。
　　方法：
　　1.以離子液體為支持電解質(zhì)，將鄰苯二胺(oPD)和多壁碳納米管(MWCNTs)原位電聚合到氧化銦錫(ITO)電極表面，形成PoPD-MWCNTs-IL復(fù)合物。
　　2.利用聚鄰苯二胺上含有的氨基基團(tuán)，通過靜電作用

3、吸附納米金后固定MPO抗體。
　　3.利用牛血清蛋白封閉納米金上的非特異吸附位點(diǎn)，從而一種用于MPO檢測(cè)的新型電化學(xué)免疫傳感器構(gòu)建完成。
　　4.通過循環(huán)伏安法(CV)和掃描電子顯微鏡(SEM)對(duì)電極修飾過程進(jìn)行表征。
　　5.對(duì)實(shí)驗(yàn)中鄰苯二胺單體的濃度、pH、孵育時(shí)間和孵育溫度等條件進(jìn)行優(yōu)化，研究其對(duì)免疫傳感器性能的影響。
　　6.在最優(yōu)條件下，對(duì)MPO標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)傳感器的選擇性、穩(wěn)定性、

4、重復(fù)性和準(zhǔn)確性進(jìn)行分析。
　　7.將電化學(xué)免疫傳感器與標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)比較，通過對(duì)臨床標(biāo)本的檢測(cè)，驗(yàn)證其是否能應(yīng)用于臨床。
　　結(jié)果：
　　1.SEM表征發(fā)現(xiàn)電極修飾成功，MPO抗體固定到了電極表面。循環(huán)伏安掃描發(fā)現(xiàn)anti-MPO/AuNCPs/PoPD-MWCNTs-il修飾的ITO電極在含1 mmol/L[Fe(CN)6]3+4-和0.1 mol/L KC1的PBS溶液(pH7.0)中電流響應(yīng)較大，不同掃描

5、速度下，氧化還原峰電流值隨掃描速度的增加而逐漸增大，并與掃描速度的平方根成正比，說明電極表面的氧化還原反應(yīng)受擴(kuò)散控制。
　　2.當(dāng)oPD濃度為0.05 mol/L，pH為7.0，孵育溫度為35℃和孵育時(shí)間20 min條件下，傳感器電流響應(yīng)最好。在最佳條件下，免疫傳感器對(duì)MPO響應(yīng)良好，MPO在0.2～23.4 ng/mL和23.4～300 ng/mL范圍內(nèi)與電流I呈線性相關(guān)，回歸方程分別為：I=-0.4793 C+93.460，R

6、2=0.995：I=-0.0739 C+84.7023，R2=0.9983，經(jīng)計(jì)算得到檢出限為0.07 ng/mL。
　　3.該免疫傳感器在有和沒有干擾物質(zhì)存在時(shí)，峰電流相差低于5.7％，將免疫傳感器在4℃下保存30天后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)響應(yīng)電流與初始電流相比下降了8％批內(nèi)、批問試驗(yàn)結(jié)果分別為3.4％和4.7％，加標(biāo)回收率在92.44％-103.2％之間。
　　結(jié)論：
　　1.通過原位電聚合技術(shù)制備的AuNPs/PoP