PEG模擬水分脅迫條件下擬南芥突變體篩選方法的研究.pdf

1、近幾年正向遺傳學(xué)的應(yīng)用使我們對植物生長，發(fā)育及對環(huán)境脅迫響應(yīng)的分子機制的認識有了巨大進展，其中尤其是植物鹽信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進展較快。而對植物抗旱的遺傳基礎(chǔ)的研究進展甚微，篩選到的擬南芥水分脅迫突變體數(shù)量很少，一個重要原因就是缺少有效的篩選方法。因此，建立既方便，可用于大規(guī)模遺傳篩選，又特異的篩選擬南芥水分脅迫突變體方法是非常必要的。
　　 本研究以擬南芥生態(tài)型Col為材料，使用大分子滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)PEG-8000來模擬干旱，在大量

2、的生理學(xué)試驗的基礎(chǔ)上，找出了相應(yīng)的指標(biāo)。通過比較不同的突變體篩選方法，建立適合實驗室內(nèi)大規(guī)模篩選的方法體系，并運用建立的篩選方法篩選了T-DNA插入的擬南芥突變體庫，對得到的可能突變體進行初步的生理學(xué)研究，初步證明了建立的篩選方法的可行性。
　　 試驗確定在擬南芥生長的萌發(fā)期和苗期進行，對于每一個生長時期，根據(jù)野生型擬南芥Col的生理反應(yīng)，確定每一種篩選方法的篩選條件(篩選時間、濃度、指標(biāo))，比較各篩選方法，確定適合該時期較好的

3、篩選方法。結(jié)果表明，在擬南芥生長的萌發(fā)期，三種篩選方法(PEG浸透濾紙為介質(zhì)篩選方法、PEG平衡瓊脂糖為介質(zhì)篩選方法、PEG平衡MS培養(yǎng)基為介質(zhì)篩選方法)均穩(wěn)定、有效適合實驗室內(nèi)大規(guī)模篩選；擬南芥苗期篩選我們選用以紗網(wǎng)作培養(yǎng)基骨架的篩選方法，其篩選條件為：施加30％的PEG溶液處理4天觀察擬南芥幼苗能否存活。運用上述方法，試驗篩選了6個T-DNA插入的突變體庫的6000粒種子，最終得到22棵可能突變體。對其中兩株M1、M2進行了離體葉片