羧甲基殼聚糖霧化吸入對(duì)氣管創(chuàng)傷后纖維化的抑制作用.pdf

1、目的:各種原因引起的氣管創(chuàng)傷或病變，造成氣管狹窄。氣管狹窄治療至今仍是十分困難，手術(shù)治療對(duì)氣管瘢痕成熟區(qū)療效顯著，而藥物治療在早期預(yù)防氣管狹窄有著積極的作用。羧甲基殼聚糖(Carboxymethyl Chitosan)是一種多糖，其由殼聚糖經(jīng)羧甲基化而得，羧甲基基團(tuán)具有強(qiáng)親水性，使其有更好的生物降解性及組織相容性，有止血、止痛和抑制微生物生長(zhǎng)的作用。此外，可促使上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制Fb增殖和遷移，達(dá)到抑制瘢痕組織形成的作用，從而加速創(chuàng)面愈

2、合。本課題通過(guò)利用球形電極電凝器灼燒法建立兔氣管狹窄，以及在氣管狹窄模型的基礎(chǔ)上霧化吸入羧甲基殼聚糖，通過(guò)病理形態(tài)學(xué)研究，并進(jìn)行比較，研究羧甲基殼聚糖霧化吸入對(duì)氣管纖維化的抑制作用。
　　方法:
　　1、第一部分以成年新西蘭大白兔22只隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組(n=12)和對(duì)照組(n=10)。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均行10-12環(huán)氣管切開(kāi)術(shù)，實(shí)驗(yàn)組用球形電極電凝器(20w)燒灼內(nèi)壁5s，而對(duì)照組不做處理，均用單絲線(xiàn)縫合氣管。在術(shù)后第7天、14

3、天和28天喉氣管鏡下觀察氣管，之后處死動(dòng)物，取材后觀察上段氣管，HE及MASSON染色后進(jìn)行觀察。
　　2、第二部分將成年新西蘭大白兔20只隨機(jī)分成藥物組(n=10)和鹽水組(n=10)。兩組氣管狹窄模型建立后，藥物組霧化吸入羧甲基殼聚糖，鹽水組霧化吸入生理鹽水。在第14天和第28天喉氣管鏡下觀察氣管瘢痕形成。在第28天處死全部動(dòng)物，取喉、上段氣管觀察，HE及MASSON染色后顯微鏡下觀察，通過(guò)霧化吸入羧甲基殼聚糖對(duì)氣管創(chuàng)傷后纖維

4、化的作用;掃描電鏡觀察霧化吸入羧甲基殼聚糖對(duì)氣管粘膜影響;心、肝、脾、肺和腎的HE染色觀察霧化吸入羧甲基殼聚糖對(duì)全身影響。
　　3、第三部分將第二部分取得標(biāo)本進(jìn)行免疫熒光抗體染色及ELISA檢測(cè)氣管組織TGF-β1的表達(dá)水平和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、第一部分研究結(jié)果顯示:喉氣管鏡檢查，術(shù)后第14天氣管灼燒處可見(jiàn)明顯的肉芽組織及瘢痕增生，氣管切開(kāi)縫合處通暢，無(wú)肉芽組織及瘢痕增。第28天氣管灼燒處瘢痕攣縮和軟骨畸形

5、愈合，可見(jiàn)明顯狹窄環(huán)，狹窄度范圍44％-62％，中位數(shù)為55％。至術(shù)28天，電凝燒灼組氣管狹窄程度逐漸增大。第28天氣管狹窄度高于灼燒后第7天，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HE染色和MASSON三色染色方法結(jié)果可見(jiàn)，術(shù)后第28天，粘膜下輕度炎癥反應(yīng)，并且無(wú)柱狀上皮再生。肉芽組織被致密的膠原纖維替代，損壞的軟骨被膠原纖維牽拉攣縮。
　　2、第二部分研究結(jié)果顯示:喉氣管鏡下檢查，術(shù)后第28天鹽水組狹窄度高于藥物組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、(P＜0.05)。氣管CT平掃可見(jiàn)藥物組兔氣管橫截面積小于鹽水組兔氣管橫截面積，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HE染色和MASSON染色見(jiàn)藥物組少量膠原纖維，表面可見(jiàn)疏松結(jié)締組織，損壞的軟骨形態(tài)完整，未見(jiàn)明顯損傷及牽拉敬痙攣。藥物組比鹽水組羥脯氨酸含量低(P＜0.05)。HE染色心臟、肝臟、脾臟、肺和腎臟組織及未建立處氣管掃描電鏡未發(fā)現(xiàn)異常。
　　3、第三部分研究結(jié)果顯示:鹽水組與藥物組相比，鹽水組TGF-β1表達(dá)陽(yáng)性纖維細(xì)胞明顯