重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺含量檢測方法與臨床應(yīng)用研究.pdf

1、本科室前期工作中發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法能夠成功檢測出腸內(nèi)制劑中谷氨酰胺(glutamine，Gln)的含量，峰面積與濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。高效液相色譜法是一種經(jīng)典的氨基酸檢測方法，結(jié)果穩(wěn)定性好，毛細(xì)管電泳是繼其之后一個新興的氨基酸檢測方法，操作簡便，試劑消耗少，分析速度快。基于此，本文利用經(jīng)典高效液相色譜法與毛細(xì)管電泳法分別分離谷氨酰胺，選擇更具優(yōu)勢的毛細(xì)管電泳法檢測血清中的谷氨酰胺，其操作過程簡單，分離效率高，成本低，結(jié)果靈

2、敏可靠，進(jìn)而應(yīng)用于臨床檢測。
　　Gln在臨床疾病中的應(yīng)用十分廣泛，近來的研究證實，Gln在創(chuàng)傷階段作為非常關(guān)鍵的信號分子，調(diào)節(jié)許多有關(guān)細(xì)胞防御與修復(fù)、代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等基因的表達(dá)，激活胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，對細(xì)胞修復(fù)和免疫調(diào)節(jié)至關(guān)重要。由創(chuàng)傷所引發(fā)的Gln需求和相關(guān)變化，目前尚未得出結(jié)論性的數(shù)據(jù)。因此，應(yīng)用現(xiàn)代方法對創(chuàng)傷狀態(tài)下Gln需要的評估是當(dāng)務(wù)之急。因此，本文成功利用毛細(xì)管電泳法測定創(chuàng)傷患者血清中的谷氨酰胺含量，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3、r>　　一、高效液相色譜法與毛細(xì)管電泳法測定谷氨酰胺的方法比較
　　目的：建立一種準(zhǔn)確、簡便、快速的方法用于測定血清及組織中谷氨酰胺的含量。
　　方法：兩種方法均以異硫氰酸苯酯作柱前衍生劑，在254 nm紫外波長處測定谷氨酰胺的含量。高效液相色譜法以反相C18柱為固定相，以50mmol/L醋酸鈉緩沖液(pH6.05)：乙腈=94:6為流動相進(jìn)行洗脫。毛細(xì)管電泳法采用重力進(jìn)樣，進(jìn)樣高度25cm，進(jìn)樣時間15s，彈性石英毛細(xì)管內(nèi)

4、徑75μm，有效分離長度55cm，分離電壓15kV，以濃度20.00mmol/L，pH9.33的硼砂緩沖溶液、166.00mmol/L的十二烷基硫酸鈉(SDS)和乙腈按10:10:3比例配置作為電泳緩沖液進(jìn)行分離。
　　結(jié)果：高效液相色譜法在0.03mmol/L-2.50mmol/L內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.997)，線性回歸方程Y=72529x+4214.6。變異系數(shù)2.46％，回收率為82.16％～115.22％，計算所得谷氨酰

5、胺的檢出限為0.01mmol/L。毛細(xì)管電泳法谷氨酰胺線性范圍為0.03mmol/L～2.00mmol/L，線性回歸方程Y=19873X+37.82，相關(guān)系數(shù)0.996。變異系數(shù)2.37％，回收率92.29％～110.28％，計算所得谷氨酰胺的檢出限為0.01mmol/L。正常人血清中Gln平均含量是0.79±0.03mmol/L。
　　結(jié)論：高效液相色譜法與毛細(xì)管電泳法紫外檢測測定血清及組織中谷氨酰胺的含量方法準(zhǔn)確可靠，毛細(xì)管電

6、泳法優(yōu)于高效液相色譜法，更適合谷氨酰胺的檢測。
　　二、重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺的含量變化及與C反應(yīng)蛋白的關(guān)系研究
　　目的：利用毛細(xì)管電泳紫外檢測重度創(chuàng)傷患者血清中谷氨酰胺含量以及觀察與C反應(yīng)蛋白的關(guān)系。
　　方法：選擇18例重度創(chuàng)傷患者，創(chuàng)傷嚴(yán)重度評分法(ATS-ISS評分)(16～25)(創(chuàng)傷組)分別在術(shù)前1d及傷后7d、14d采集靜脈血制備血清，同期選擇我院正常健康體檢人群10例為對照組，同法制備血清。用毛細(xì)

7、管(75μm×55cm)，以硼砂(20mmol/L，pH9.33)、十二烷基硫酸鈉(166.00mmol/L)和乙腈按10:10:3配置緩沖液，異硫氰酸苯酯為衍生劑，電壓15kV，紫外吸收波長254nm，檢測兩組血清谷氨酰胺及C反應(yīng)蛋白含量。
　　結(jié)果：谷氨酰胺濃度在0.03～2.00mmol/L范圍內(nèi)線性范圍良好，線性回歸方程Y=19873X+37.82，相關(guān)系數(shù)為0.996；變異系數(shù)為2.37％，平均回收率范圍為92.29％～