阿托伐他汀鈣對成骨細(xì)胞增殖和OPG-RANL系統(tǒng)的影響.pdf

1、背景：他汀類藥物，是目前臨床上用于降低血膽固醇的藥物，但是在一項(xiàng)回顧性研究中顯示，老年婦女服用他汀類藥物在降低膽固醇的同時，髖骨密度明顯增加，提示他汀類具有改善骨密度的作用。OPG/RANKL系統(tǒng)是近年發(fā)現(xiàn)的，在骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制及治療中起著重要作用的一個系統(tǒng)。
　　 目的：研究不同濃度的阿托伐他汀鈣對體外培養(yǎng)的原代成骨細(xì)胞增殖的影響及對OPG，RANKL，M-CSF基因表達(dá)的影響，探討阿托伐他汀鈣抗骨質(zhì)疏松的分子機(jī)制，為臨床用

2、藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：（1）采用胰酶和Ⅰ型膠原酶混合酶消化法分離獲得原代成骨細(xì)胞；采用“差速貼壁法”進(jìn)行純化。光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長狀況，通過堿性磷酸酶染色和Ⅰ型膠原免疫組化染色SABC法對細(xì)胞進(jìn)行鑒定。（2）取第二代成骨細(xì)胞，用不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）干預(yù)成骨細(xì)胞，在24h，48h，72h后分別采用噻唑藍(lán)(MTT)法測定其在490nm處的吸光度值（O

3、D值），了解阿托伐他汀鈣對細(xì)胞增殖的影響。（3）用不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）干預(yù)成骨細(xì)胞，在24h，48h，72h后，用實(shí)時熒光定量方法檢測OPGmRNA，RANKLmRNA,M-CSFmRNA的表達(dá)水平。（4）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用±ｓ表示，應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA)。P﹤0.05，有顯著性差異。<

4、br>　　 結(jié)果：（1）鏡下觀察所獲得的細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的典型特征，細(xì)胞多為單核，呈三角形、多邊形、長梭形等形態(tài)，并伸有粗大偽足；堿性磷酸酶染色及Ⅰ型膠原免疫組化染色呈陽性。（2）MTT法結(jié)果顯示：不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）在作用于大鼠原代成骨細(xì)胞24小時后，與空白對照組比較，各加藥組吸光度值（OD值）沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。在作用48小時及72小時后，與空白對照

5、組比較，各加藥組OD值均大于對照組，在濃度為10-9，10-8，10-7 ，10-6mol/L時具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。（3）實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示：不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10-7，10-6，10-5mol/L）可以促進(jìn)OPG及M-CSF基因mRNA的表達(dá)，抑制RANKL基因mRNA的表達(dá)，這種作用可能和藥物濃度及作用時間有關(guān)。
　　 結(jié)論：（1）采用胰酶和Ⅰ型膠原酶混合酶消化法體外分離成骨細(xì)胞