柚皮苷對成骨細胞系MC3T3-E1和小鼠顱頂骨骨形成的作用研究.pdf

1、骨組織工程中運用各種生物因子及支架研究骨代謝過程中的骨形成及骨吸收成為當下科學研究及臨床關注的重點。鑒于現(xiàn)有臨床藥物在骨改建過程中促骨形成時的副作用，植物源性促骨形成藥物成為當下科研焦點，然而研究藥物對單一離體細胞分化成骨作用并不能為藥物的臨床使用提供有力的證據(jù)。本實驗擬研究骨碎補主要活性物質(zhì)-柚皮苷對成骨細胞系MC3T3-E1的促骨形成作用，同時選擇藥物與顱頂骨器官建立共培養(yǎng)模型，運用Micro-CT掃描技術分析藥物對系列骨細胞（骨細

2、胞、成骨細胞及破骨細胞）、骨基質(zhì)等共存下的顱頂骨器官骨形成的作用。
　　目的：
　　1.在分析區(qū)域包含整個顱頂骨的前提下，改變Micro-CT掃描后二維圖像的重建層數(shù)或者位置，比較進行重建后的骨量參數(shù)(骨表面積、骨體積)是否出現(xiàn)改變。
　　2.分析柚皮苷對成骨細胞系MC3T3-E1和顱頂骨骨形成的作用。
　　方法：
　　1.Micro-CT掃描4日齡CD-1小鼠顱頂骨，三維重建時改變空白分析區(qū)域?qū)訑?shù)或位置來

3、分別分析：
　　①996～22層組與800～50層組，分析層數(shù)不同；
　?、?96～22層組與隨機選擇層組，分析層數(shù)不同；
　?、劢吔缟暇壗M與近邊界下緣組，分析層數(shù)相同的骨量參數(shù)變化。
　　2.不同濃度柚皮苷作用于MC3T3-E1后通過CCK-8法檢測細胞生長、定量分析細胞分泌蛋白ALP、RT-PCR法檢測MC3T3-E1細胞RUNX2、OCN和OPN基因mRNA表達量、茜素紅染色柚皮苷作用下細胞礦化結節(jié)形成。

4、
　　3.不同濃度柚皮苷作用于顱頂骨后通過Micro-CT掃描分析顱頂骨骨量參數(shù)（骨表面積、骨體積）的變化。
　　結果：
　　1.在分析區(qū)域包含整個顱頂骨的前提下：
　?、僭黾踊蛘邷p少空白分析層數(shù)會導致顱頂骨骨表面積變化，而骨體積無變化。
　　②隨機選擇層數(shù)組與996～22層數(shù)組分析比較時顱頂骨骨表面積、骨體積均有變化。
　?、壑亟▽訑?shù)相同的前提下，改變分析區(qū)域位置時顱頂骨骨表面積、骨體積無變化。

5、r>　　2.不同濃度柚皮苷（0mg/L、1mg/L、10mg/L）均可促進MC3T3-E1的RUNX2、OCN、OPN表達上調(diào)及細胞礦化結節(jié)形成，但1mg/L濃度柚皮苷促成骨作用較10 mg/L組顯著。
　　3.不同濃度柚皮苷作用的離體培養(yǎng)顱頂骨骨表面積和骨體積無明顯變化。
　　結論：
　　1.柚皮苷可促體外培養(yǎng)MC3T3-E1細胞成骨向分化，而對體外培養(yǎng)顱頂骨骨形成無明顯作用。
　　2.Micro-CT三維重建