ROS-AKT-mTOR信號(hào)軸在高糖誘導(dǎo)MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬中的作用.pdf

1、目的：探討高糖環(huán)境下ROS-AKT-mTOR信號(hào)軸在MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬和增殖、凋亡中的作用。
　　方法：將體外培養(yǎng)的MC3T3-E1成骨細(xì)胞分為正常對(duì)照組、NAC組、11.0mmol/L葡萄糖組、11.0mmol/L葡萄糖+NAC組、22.0mmol/L葡萄糖組、22.0mmol/L葡萄糖+NAC組、CQ組、22.0mmol/L葡萄糖+CQ組。采用DCFH-DA探針試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平；采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖；采

2、用Annexin V-FITC/PI試劑盒處理不同組別MC3T3-E1成骨細(xì)胞，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；采用 Honchest33258染核，免疫熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞核形態(tài)；應(yīng)用Western Blot和免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞凋亡率較正常對(duì)照組均顯著增加（P＜0.01），且細(xì)胞凋亡率隨著葡萄糖濃度升高而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

3、。（2）與正常對(duì)照組相比，11.0mmol/L葡萄糖組 MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖輕微下降（P＞0.05），22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖顯著降低（P＜0.01），且細(xì)胞增殖能力隨著葡萄糖濃度升高而降低。（3）與正常對(duì)照組相比，11.0mmo/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II和Beclin1蛋白表達(dá)顯著增加，P62蛋白表達(dá)顯著下降；22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-

4、II蛋白表達(dá)顯著下降（P＜0.01），Beclin1和P62蛋白表達(dá)增加（P＜0.01；P＞0.05）。與正常對(duì)照組相比，CQ組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II蛋白表達(dá)增加（P＜0.05）。與22.0mmol/L葡萄糖組和CQ組相比，22.0mmol/L葡萄糖+CQ組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.01）。（4）與正常對(duì)照組相比，11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成

5、骨細(xì)胞胞內(nèi)ROS水平均顯著增加（P＜0.01），但無(wú)明顯濃度依賴(lài)性。NAC可顯著降低,MC3T3-E1成骨細(xì)胞胞內(nèi) ROS的生成，并改善高糖所致的凋亡增加、增殖下降和自噬水平上升。（5）與正常對(duì)照組相比，11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1細(xì)胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)下調(diào)，NAC可上調(diào)MC3T3-E1成骨細(xì)胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：（1）高糖環(huán)境下MC