組織工程皮膚新模型的刺激試驗研究.pdf

1、目的：構(gòu)建以人永生化角質(zhì)形成細胞 HaCaT為種子細胞，絲素蛋白修飾聚酯/聚酰胺的無紡布支架的組織工程皮膚模型，并與動物實驗作對比，觀察這自制模型的靈敏度、特異度和準確性差別和優(yōu)劣，為該組織工程皮膚模型取代動物模型提供相應的實驗依據(jù)。
　　方法：1采用含血清的高糖培養(yǎng)基對 HaCaT細胞進行培養(yǎng)，待細胞生長達到80％時，接種于絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺的無紡布支架上，利用掃描電鏡觀察接種后第一天、第三天 HaCaT細胞在支架上的生

2、長狀況與空白支架進行對照，檢測HaCaT細胞在支架材料上的黏附和增殖情況。2以絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺無紡布為支架，熱塑形成托盤狀，大小適合于24孔板，將成纖維細胞接種培養(yǎng)4天后，再接種人永生化角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)，待3天左右細胞相互融合長滿支架時將模型氣-液面培養(yǎng)2周，構(gòu)建出檢測用的組織工程皮膚模型。將培養(yǎng)不同時間的皮膚模型進行石蠟切片并常規(guī) HE染色，觀察皮膚模型的細胞分層狀態(tài)。3從歐洲替代方法實驗驗證中心（ECVAM）規(guī)定用于皮膚刺

3、激性的物質(zhì)中選取20種化學品，刺激物局部接觸皮膚模型后，應用 MTT比色法測定細胞相對活力，然后收集條件培養(yǎng)基用 ELISA法檢測 IL-1α因子，評價構(gòu)建的皮膚模型的靈敏度和特異性。4將20種化學品在動物體內(nèi)進行急性經(jīng)皮試驗，根據(jù)紅斑、水腫等皮膚反應來評價化學品的皮膚刺激強度。
　　結(jié)果：1絲素蛋白修飾用熱塑形成托盤狀的聚酯/聚酰胺復合無紡布支架，其本身形成許多微孔結(jié)構(gòu)有一定的通透性，HaCaT細胞能在支架上良好的生長并可以黏附

4、在無紡布纖維上。2將 HaCaT細胞和成纖維細胞成功接種到絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺復合無紡布支架上氣-液培養(yǎng)2周后，HE染色法和掃描電鏡的觀察初步形成15層左右復層細胞層與天然細胞的層數(shù)很相似，但未形成角質(zhì)層。3選取了20種化學品在組織工程皮膚模型上成功的進行了檢測，結(jié)果顯示皮膚模型的敏感性為72.7%，特異性為77.8%，準確率為75%。4構(gòu)建的皮膚模型與動物模型作對比，有4種化學品判斷出現(xiàn)錯誤。
　　結(jié)論：1成功制備了以絲素