板藍根高級不飽和脂肪酸衍生物J抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的：分別在體內(nèi)、外環(huán)境下，研究化合物J的抗腫瘤活性，及其對腫瘤多藥耐藥(MDR)的逆轉(zhuǎn)活性，并對其抗腫瘤機制進行初步的研究。為其進入新藥臨床前研究提供前期實驗依據(jù)。
　　 方法：①體外抗腫瘤實驗：用MTT法觀察化合物J的抗腫瘤作用，采用流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化及細胞凋亡；在體動物實驗：建立TCA8113舌癌細胞裸鼠皮下移植瘤模型，研究化合物J對腫瘤細胞的抑制作用，用免疫組織化學染色法檢測Ki-67的表達，流式細胞術(shù)檢測其細

2、胞周期和凋亡情況。②體外MDR逆轉(zhuǎn)活性及其逆轉(zhuǎn)機制：用濃度梯度遞增法誘導培養(yǎng)BEL-7404和TCA8113耐藥細胞株，并測定其耐藥指數(shù)，用MTT法檢測化合物J對耐藥細胞株的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。經(jīng)化合物J+ADM聯(lián)合作用于耐藥細胞后，用流式細胞術(shù)檢測其細胞周期的變化和ABCG2的表達。
　　 結(jié)果：①Ⅰ：在體外，化合物J的濃度低于100μg/ml時，對HUV-EC-C細胞無抑制作用(OD值均高于空白組的OD值0.215)；濃度低于250μ

3、g/ml時，對BEL-7404和TCA8113細胞的抑制率均低于0。流式細胞術(shù)檢測TCA8113細胞周期的情況：作用濃度為250μg/ml，G1期細胞為52.28％，G2期細胞為6.47％，S期細胞為41.25％，而陰性對照組G1期細胞為49.35％，G2期細胞為7.12％，S期細胞為43.53％；化合物J作用濃度為50μg/ml時，細胞早期凋亡率為0.46％，晚期凋亡及壞死率為3.7％；濃度為10μg/ml時，細胞早期凋亡率為0.26

4、％，晚期凋亡及壞死率為3.36％。Ⅱ：在體內(nèi)裸鼠皮下移植瘤實驗中，化合物J劑量為5mg/kg時，對裸鼠皮下移植瘤瘤塊重量抑制率為33.47％，體積抑制率為31.33％；2.5mg/kg時，對瘤塊重量抑制率為12.75％，體積抑制率為9.87％；1.25mg/kg時，對瘤塊重量抑制率為78.49％，體積抑制率為70.39％。免疫組織化學染色結(jié)果顯示：Ki-67在各組均有陽性表達，在陰性組中陽性率最高(47.36±1.53％)；經(jīng)化合物J2

5、.5mg/kg作用后，陽性率明顯減少(7.93±1.42％)，陽性對照組也減少(28.64±2.06％)；周期檢測結(jié)果顯示：給藥后G1、G2期和S期與陰性組相比，差異無統(tǒng)計學意義；化合物J給藥劑量為2.5mg/kg時，細胞早期凋亡率為3.045±0.525％，晚期凋亡及壞死率為17.96±1.84％，均高于陰性對照組(早期凋亡率為1.24％，晚期凋亡及壞死率為1.52％)。②Ⅰ：成功構(gòu)建了BEL-7404和TCA8113耐ADM的耐藥細

6、胞株；化合物J對TCA/ADM耐0.1μg/ml細胞的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(RF)為3.17，相對逆轉(zhuǎn)效應(yīng)為68.59％，陽性對照(VRP)RF為62.69，相對逆轉(zhuǎn)效應(yīng)為98.54％；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：單用ADM作用時，G1期細胞為3.22％，G2期細胞為72.59％，S期細胞為24.19％，J+ADM聯(lián)合作用后，G1期細胞為0.62％，G2期細胞為45.31％，S期細胞為54.08％。與單用ADM組相比，G1期細胞基本未變，G2期降低，S期升

7、高，VRP+ADM聯(lián)合作用后，G1期細胞為49.42％，G2期細胞為16.07％，S期細胞為34.51％；經(jīng)化合物J逆轉(zhuǎn)前后，ABCG2的表達率均很低，分別為0.65％和1.86％。
　　 結(jié)論：①在體外，化合物J并無明顯抗腫瘤作用；在體內(nèi)有顯著的腫瘤抑制作用，但與細胞周期的調(diào)控無明顯關(guān)系，與誘導細胞凋亡密切相關(guān)，下調(diào)了Ki-67的表達。②化合物J對TCA/ADM有明顯的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，并影響了細胞周期，與耐藥相關(guān)蛋白ABCG2的