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文檔簡介
1、母源抗體傳遞給新生動物對于其剛出生時期的健康十分重要,偶蹄類動物主要是通過初乳中高含量的IgG傳遞給后代,從而達到對后代的被動免疫的作用。關(guān)于初乳中高IgG含量的形成機理至今還不是很清楚,牛Fc受體(bFcRn)是能結(jié)合IgG的一種主要的受體,它被認(rèn)為參與了這個過程,因此研究牛Fc受體在乳腺組織中的功能顯得十分重要。同時從普通牛奶中分離的牛源抗體是很好的人源抗體代用品,進一步了解bFcRn的作用機制,為生產(chǎn)高免疫球蛋白含量的牛奶——初乳
2、化牛奶和開拓新的乳品質(zhì)改良的新方法打下堅實的基礎(chǔ)。本研究主要側(cè)重在牛Fc受體在乳腺組織中對于IgG的作用,構(gòu)建了在乳腺組織特異表達的牛Fc受體表達載體,利用顯微共注射的方法制備了轉(zhuǎn)基因小鼠,研究了多拷貝整合對于外源基因表達的影響,檢測了泌乳期小鼠乳中和血液中IgG的水平。通過尾靜脈注射人工IgG研究了在泌乳期人IgG在小鼠體內(nèi)的代謝情況,注射等量的牛IgG1和IgG2研究了轉(zhuǎn)基因小鼠在泌乳期對于牛IgG亞型的不同轉(zhuǎn)運作用。 通
3、過共顯微注射得到了10只轉(zhuǎn)基因陽性小鼠,其中8只雙亞基整合,2只單亞基整合。由于部分種公鼠采用的是能在乳腺特異表達人單抗的轉(zhuǎn)基因小鼠,我們同時還得到了3只四鏈整合的轉(zhuǎn)基因小鼠,即抗體的重鏈和輕鏈,還有牛Fc受體的大亞基和小亞基。通過Southern雜交鑒定了所有的轉(zhuǎn)基因小鼠都具有完整的啟動區(qū)結(jié)構(gòu),而且轉(zhuǎn)基因大亞基的拷貝數(shù)為1-15,小亞基的整合拷貝數(shù)為1-10,大亞基和小亞基的整合拷貝數(shù)并不成比例,都是隨機整合的。轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺組織的R
4、T-PCR證明了牛Fc受體在RNA水平的正確表達,Nor thern雜交證明了牛Fc受體表達的組織特異性,即牛Fc受體的大亞基只在泌乳期轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺組織中表達。而且對于F1代轉(zhuǎn)基因小鼠的表達分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因結(jié)構(gòu)能穩(wěn)定的遺傳到后代中,但是同時我們也觀察到了大亞基和小亞基在后代中的分離,特別是四鏈整合的轉(zhuǎn)基因小鼠,后代中很少再有四鏈整合的小鼠。定量PCR檢測了不同轉(zhuǎn)基因系牛Fc受體表達的水平差異,牛Fc受體大亞基表達水平的高低基本與其
5、轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)相關(guān)。牛Fc受體的過量表達并沒有影響到鼠內(nèi)源FcRn受體的表達,鼠FcRn受體的表達在各個轉(zhuǎn)基因系間沒有明顯的差別。我們檢測了泌乳中期轉(zhuǎn)基因小鼠乳中和血液中的IgG變化,發(fā)現(xiàn)各個轉(zhuǎn)基因小鼠乳汁中的IgG含量比非轉(zhuǎn)基因小鼠有明顯的提高,而乳中IgA的含量卻沒有明顯的差異,這說明乳中免疫球蛋白含量的變化是IgG特異性的,同時相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因小鼠血液中的IgG含量也有提高。 注射人IgG作為示蹤抗體,研究了人IgG在泌乳期轉(zhuǎn)
6、基因小鼠中的代謝,發(fā)現(xiàn)人IgG在轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的半衰期比野生型小鼠延長了2-3倍,而且單亞基整合的轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)人IgG的半衰期要比雙亞基整合的轉(zhuǎn)基因小鼠的要長。泌乳期乳中的免疫球蛋白絕大部分都是來源于血液中,所以正是由于小鼠體內(nèi)IgG半衰期的延長導(dǎo)致了血液中IgG的累積,從而同時導(dǎo)致了乳中IgG含量的增加。給轉(zhuǎn)基因小鼠注射等量牛IgG1和IgG2后,IgG1的轉(zhuǎn)運與bFcRn的表達并沒有很大關(guān)聯(lián),而IgG2的轉(zhuǎn)運受到了bFcRn的影響
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